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mooc分子生物学实验_7课后答案(mooc完整答案)

mooc分子生物学实验_7课后答案(mooc完整答案)

学习成果基本检验

分子生物学实验客观题测试

1、分生在基因工程中所用的物学完整限制性核酸内切酶是指
A、I 型限制性核酸内切酶
B、实验II型限制性核酸内切酶
C、课后III型限制性核酸内切酶
D、答案答案核酸外切酶

2、分生多数限制性核酸内切酶消化 DNA 的物学完整最佳温度是
A、37℃
B、实验42℃
C、课后25℃
D、答案答案16℃

3、分生制备大肠杆菌感受态细胞采用的物学完整是哪个时期的细胞?
A、潜伏生长期
B、实验对数生长期
C、课后平衡生长期
D、答案答案衰亡期

4、用于质粒提取的溶液Ⅱ的主要成分为
A、SDS和EDTA
B、SDS和NaOH
C、EDTA和NaOH
D、SDS和冰乙酸

5、同一种质粒 DNA存在的三种不同构象,以1%凝胶电泳时,它们的泳动速度是
A、单链开环DNA>超螺旋闭合环状DNA>线性DNA
B、超螺旋闭合环状DNA>线性DNA>单链开环DNA
C、线性DNA>单链开环DNA>超螺旋闭合环状DNA
D、线性DNA>超螺旋闭合环状DNA>单链开环DNA

6、用碱裂解法提取质粒 DNA时,染色体DNA之所以被除去,是因为
A、染色体 DNA断成了碎片
B、染色体 DNA分子量大,而不能释放
C、染色体变性后来不及复性
D、染色体未同蛋白质分开而沉淀

7、以碱裂解法提取质粒 DNA,下面说法不正确的是
A、溶液Ⅰ的作用是重新悬浮细菌
B、溶液Ⅱ的作用是裂解细菌
C、溶液Ⅲ的作用是使 DNA复性
D、质粒 DNA分子小,没有变性,而染色体DNA变性后不能复性

8、下面哪一项不是产生限制性核酸内切酶产生星活性的主要原因?
A、甘油含量过高
B、反应体系中含有有机溶剂
C、酶浓度过低
D、离子强度过低

9、限制性核酸内切酶可以特异性地识别
A、双链 DNA的特定碱基序列
B、特定的三联密码
C、单链 DNA的特定碱基序列
D、RNA的特定碱基序列

10、限制性核酸内切酶的星活性是指
A、在非标准条件下,识别和切割序列发生变化的活性
B、活性大大提高
C、切割速度大大加快
D、识别序列与原来的序列完全不同

11、引物是指同DNA互补的一小段RNA分子。

12、逆转录时,使用 AMV比使用 M-MLV可得到较多的cDNA第一链。

13、碱裂解法提取质粒DNA的过程中,NaOH的作用是使细菌细胞裂解。

14、核酸电泳染色时,溴乙锭的终浓度为1mg/ml

15、蛋白质免疫印迹的实验中,可以直接跳过二抗杂交而进行显影。

16、逆转录PCR与实时定量PCR之间没有什么区别。

17、为了检测人类基因组DNA完整性,采用琼脂糖凝胶电泳的方法就够了。

18、免疫共沉淀实验是检测蛋白与蛋白之间的相互作用。

19、实验室安全环保是第一位的。

20、在某些情况下,微量移液器的第二档可以用来吸液。

21、碱裂解法提取质粒时,若提取结果最理想时,电泳时看到的质粒构象是

22、提取RNA实验中用到的DEPC,其作用是

23、未显著降解的总RNA样品经琼脂糖电泳,亮度最大的条带应是

24、RT-PCR过程中,PCR的模板是

25、PCR扩增主要热循环过程的三个步骤为 、 、 。

26、PCR经过一定数量的循环后,随着产物的对数累积趋于饱和,DNA分子数不再呈 积累,而是进入线性增长期或静止期,此过程称为

27、大肠杆菌转化实验中,热休克处理的温度是 。

28、在酶切反应管加完各种反应物后,需要离心2s,其目的是 和 。

29、SDS是分离一种常用的阴离子除垢剂,在分离DNA时,它的作用有:(1) ;(2) ;(3) ;(4) 。

30、同其他水解蛋白酶相比,蛋白水解酶 K具有两个优点:(1) ;(2) 。

中国大学分子生物学实验_7

在本次中国大学分子生物学实验_7中,我们将学习关于RNA干扰技术的实验操作流程和相关注意事项。

实验目的

1. 学习RNA干扰是如何抑制基因表达的。

2. 掌握RNA干扰的实验流程。

3. 了解RNA干扰实验中需要注意的事项。

实验原理

RNA干扰是一种通过引入外源性小分子RNA,抑制特定基因表达的方法。在生物体内,RNA干扰途径与细胞自身RNA降解途径有关。RNA干扰技术分为siRNA和miRNA两种类型。

siRNA和miRNA的区别如下:

  • siRNA是由外源性双链RNA加工而成,长度为21~23个核苷酸,是干扰RNA的双链结构。
  • miRNA是由内源性单链RNA(长度约20~22个核苷酸)加工而成,是干扰RNA的单链结构。

实验中,我们将使用siRNA引入外源性RNA,使其与内源性RNA结合,形成双链RNA,从而抑制特定基因的表达。

实验步骤

材料与仪器

  • 细胞培养物(如293T细胞),含10% FBS的DMEM培养液
  • siRNA(小分子RNA)
  • 转染试剂
  • 35mm培养皿
  • 离心管
  • 显微镜
  • 倒置显微镜

实验操作流程

  1. 将细胞接种到含10% FBS的DMEM培养液中,培养24小时。
  2. 将siRNA和转染试剂按照比例混合后,加入到含有细胞的培养液中。
  3. 将液体混匀,并进行转染。转染时间为6小时。
  4. 将细胞培养24小时后,观察细胞状态,使用显微镜检查是否产生了RNA干扰。
  5. 将细胞收集,进行RNA提取,并进行实时荧光定量PCR检测RNA干扰效果。

注意事项

  • 实验前要进行无菌操作,防止细菌污染。
  • 所有材料和仪器要在实验前进行消毒。
  • 转染试剂和siRNA的配比要准确。
  • 转染时间要控制在6小时内,过长时间会影响细胞状态。
  • 细胞收集时要避免过度剥离,以免影响RNA的提取和检测。

实验结果分析

通过显微镜观察,可以发现RNA干扰后,细胞形态发生了改变,细胞数量也明显减少。这是因为RNA干扰抑制了特定基因的表达,导致细胞凋亡或增殖受到影响。

通过实时荧光定量PCR检测,可以进一步验证RNA干扰的效果。我们可以看到,与对照组相比,RNA干扰后,特定基因的表达明显下降。

结论

RNA干扰技术是一种有效的基因编辑方法,可以用于研究基因功能、筛选药物靶点等。在RNA干扰实验中,要掌握实验原理和实验步骤,严格控制实验条件,避免实验误差产生。通过实验结果分析,可以验证RNA干扰的效果,并得出结论。

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