mooc分子生物学实验_3答案(慕课2023课后作业答案)

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1 无菌操作技术与主要仪器设备的分生使用

实验1和2 小测

1、使用超净工作台进行无菌操作实验前，物学至少开启紫外灯照射杀菌__。实验
A、答案答案5min
B、慕课15min
C、课后30min
D、作业10min

2、分生制作固体平板时，物学加入抗生素时所用培养基的实验适宜温度-般为___。
A、答案答案20-30°C
B、慕课30-40°C
C、课后50-60°C
D、作业70-80°C

3、分生制作酒精棉球常用的酒精浓度为___。
A、50%
B、75%
C、80%
D、95%

4、配制LB固体培 养基常用的琼脂浓度为__。
A、1.0-2.0%
B、4%
C、3%
D、0.3%

5、LB培养基灭菌的常用方法是__。
A、紫外线消毒
B、煮沸法灭菌
C、高压蒸汽灭菌
D、干热灭菌

6、琼脂在LB固体培养基中的作用是提供__。
A、碳源
B、氮源
C、生长因子
D、凝固因子

7、酒精灯使用时加入工业酒精或95%乙醇应占酒精壶体积的（ ）
A、1/3
B、2/3
C、1/2
D、装满

8、高压灭菌锅使用前检查水位，水位一般要位于（ ）。
A、高水位之上
B、高水位之下
C、低水位之下
D、高水位和低水位之间

9、0.5 mM EDTA 配置过程中，应调节PH为（ ）。
A、7.0
B、7.5
C、7.8
D、8.0

10、以下为本学期分子生物学实验授课教师的是 （ ）。
A、王瑞菊
B、赵红桃
C、郑术芝
D、刘昕晔

11、下列试剂可用于沉淀DNA的有_。
A、异丙醇
B、无水乙醇
C、无水甲醇
D、70%乙醇

12、实验2中提取基因组DNA时，破碎小麦叶片所用的方法_。
A、液氮研磨
B、加入细胞提取液
C、超声波法
D、冻融法

13、关于视频中溶液的配制，下列说法正确的是_。
A、配制溶液时，-般先调pH，然后再定容。
B、使用酚-氯仿-异戊醇溶液时，需要吸取上层溶液使用。
C、配制溶液1时，可以使用0.5mol/L EDTA母液配制，也可以加入已称量好的EDTA干粉配制。
D、配置好的50mg/ml羧苄青霉素溶液，可以直接使用,不用过滤除菌。

14、使用离心机时，一定要将同样重量的离心管对称放入离心转子内让离心机的轴受力平衡。

15、电子天平使用时一定要调水平，并依据称量需求选择不同精度和量程的天平。

16、高压灭菌结束后，压力降到0 Mpa时就可以从高压锅内取出灭菌物品。

17、配制EDTA溶液时，EDTA在酸性条件下才能溶解。

18、以水为溶剂配制的抗生素溶液需要过滤除菌后才能使用。

19、-般Tris饱和酚用于分离RNA,水饱和酚用于分离DNA

学习笔记具体要求及提交档口

1、无菌操作技术与主要仪器设备的使用 本章五部分视频的主要内容有哪些，及每部分视频包含的具体内容有哪些，举例一些典型的实验操作注意事项。

2 植物DNA提取

实验二 实验报告

1、实验二 植物基因组DNA提取 实验目的、实验原理、实验材料和试剂（各种试剂的主要功能需写清楚）、实验步骤（逐条展示）、实验结果与分析（利用慕课视频提供的图片进行结果描述与分析）.

3 肝脏DNA的提取

实验三 实验报告及思考题

1、实验三 动物肝脏DNA提取实验报告（实验目的、原理、材料和试剂、步骤及注意事项），思考题：实验中柠檬酸钠、SDS、氯仿-异戊醇、氯化钠分别有什么作用？

4 质粒DNA提取

实验3和4 小测

1、用碱裂解法提取质粒DNA的基本原理是__。
A、染色体DNA断裂成碎片
B、染色体DNA分子量大不能释放
C、染色体DNA变性后不如质粒DNA复性快
D、染色体未与蛋白质分开而沉淀

2、提取质粒DNA过程中,向氯仿-异戊醇处理的上清液中加入无水乙醇的主要目的是（）
A、去除蛋白
B、去除断裂的基因组DNA
C、浓缩和沉淀质粒DNA
D、去除RNA

3、RTE试剂中能抑制DNA酶活性的化学物质是__。
A、EDTA
B、RNA酶
C、Tris
D、盐酸

4、关于碱裂解法分离质粒DNA的说法,错误的是__。
A、溶液I的作用是悬浮菌体
B、溶液II的作用是使DNA变性
C、溶液II的作用是使DNA复性
D、质粒DNA分子小没有变性

5、碱裂解法中第一步试剂中常含有EDTA,其作用是( ) 。
A、裂解细菌
B、调节pH
C、促进RNA水解
D、螯合镁离子和钙离子,抑制DNase活性

6、肝脏DNA提取时,以下哪种浓度的盐溶液可以最大程度地溶解DNA
A、0.5 mol/L
B、10 mol/L
C、0.05 mol/L
D、1 mol/L

7、关于动物肝脏DNA的提取步骤,以下说法正确的有( ) 。
A、玻棒缠绕DNA时,应快速并向同一方向搅拌。
B、大块的肝脏组织可以直接匀浆。
C、固体NaCl加入时，应分批加入，边加边摇晃，避免局部盐浓度过大。
D、DNA提取过程应避免过酸、过碱、高温及机械张力损伤。

8、碱裂解法提取质粒时,裂解大肠杆菌所需要的成分是_。
A、0.2M NaOH
B、0.4M Na2C03
C、0.4M NaHCO3
D、1.0%SDS

9、质粒DNA提取过程中可以使用旋涡振荡的操作步骤包括_。
A、菌体重悬
B、加入溶液I后的菌体裂解
C、加入溶液III后的混匀中和
D、加入75%乙醇清洗沉淀的质粒DNA

10、碱裂解法分离质粒DNA是根播质粒DNA与染色体DNA的分子量差异而设计的。

11、碱裂解法提取的质粒DNA分子全部具有超螺旋结构。

12、酚-氯仿-异伐醇试剂中氯仿的作用是使水相和有机相分界更为明显。

13、天然的质粒都是环状单链DNA。

14、SDS是一种阴离子表面活性剂，有助于菌体裂解，又能使蛋白质保持天然活性。（ ）

15、染色体DNA与蛋白SDS钾盐结合在一起形成微溶性复台物， 离心后沉淀中合有染色体DNA ,而上清中含有质粒DNA。

16、（ ）是独立于细菌染色体外，能自主复制的遗传因子，可以稳定地遗传细菌的某些性状。

实验4 实验报告

1、根据慕课视频，写一份实验报告（实验目的 原理 材料和试剂 步骤），完成思考题（1 什么是质粒？2 一个理想的质粒克隆载体应具有哪些特点？）

5 目的基因的PCR扩增

目的基因的PCR扩增-单元测验

1、有关PCR的描述，错误的是 。
A、PCR反应是一种酶促反应
B、一般选用94℃进行模板变性
C、扩增的对象是DNA序列
D、扩增的对象是氨基酸

2、PCR实验的特异性主要取决于 。
A、DNA聚合酶的种类
B、反应体系中模板DNA的量
C、引物序列的结构和长度
D、四种dNTP的浓度

3、以下获得过诺贝奖的技术方法是 。
A、PCR
B、BiFC
C、Y2H
D、Co-IP

4、PCR过程中的注意事项包括是 。
A、由于PCR灵敏度非常高，所以应当采取措施以防反应混合物受到污染。
B、操作中所用的PCR管、离心管、吸管头等都只能一次性使用。每加一种反应物，应换新的枪头。
C、设置严格的阳性对照和阴性对照。
D、注意不能有RNA酶的污染。

5、PCR反应体系中关于Mg 2+浓度描述正确的是 。
A、Mg 2+浓度对Taq DNA聚合酶影响很大, 它可影响酶的耐热性和蛋白质的稳定性。
B、Mg 2+浓度过低，会显著降低酶活性；Mg 2+浓度过高又使酶催化非特异性扩增增强。
C、Mg 2+浓度还影响引物退火和解链温度以及引物二聚体的形成等。
D、通常Mg 2+ 浓度范围为0.5-2mmol/L, 1.5mM最佳。

6、PCR中的引物是一小段同DNA互补的RNA分子。

7、PCR反应的循环过程包括变性、退火和延伸。

8、PCR的循环次数主要取决于DNA浓度，一般而言25-30轮循环已经足够。循环次数过多，会使 。

9、在PCR第一轮循环前,在94℃下预变性3-5min非常重要，它的作用是 。

10、dNTP包括哪四种 。

目的基因的PCR扩增-学习笔记（实验报告）提交

1、请各位同学认真撰写实验报告。实验报告的内容：实验题目、实验目的、实验原理、实验试剂和用品、实验步骤、实验注意事项。注意：实验步骤中需要根据《目的基因PCR扩增-PPT（含实验步骤要求、思考题和部分小测答案）》中的要求撰写，并给出思考题答案。

6 琼脂糖凝胶电泳检测DNA

琼脂糖凝胶电泳检测DNA小测

1、琼脂糖凝胶电泳胶中的DNA是靠（）发出荧光的？
A、琼脂糖
B、溴酚蓝
C、溴化乙锭
D、二甲苯腈

2、在琼脂糖凝胶电泳停止时，下列长度DNA分子位于凝胶（垂直放置）最下端的是：（）
A、500bp
B、700bp
C、1000bp
D、1200bp

3、DNA分子构象是影响其在电泳中迁移速率的重要因素，下列迁移速率排列顺序正确的是：（）
A、线状DNA>开环DNA>共价闭环DNA
B、共价闭环DNA>开环DNA>线状DNA
C、共价闭环DNA>线状DNA>开环DNA
D、三者相等

4、下列属于loading buffer作用的是：（）
A、溶解琼脂糖
B、增加样品比重，以确保DNA均匀沉入加样孔内。
C、预测核酸电泳的速度和位置。
D、使样品呈色，使加样操作更方便。

5、在琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验中，宇轩同学进行了下列操作，其中错误的是：
A、徒手从微波炉中取出盛有煮沸的琼脂糖溶液的三角瓶。
B、将DNA样品滴加在电泳仪的正极端。
C、带上双层手套将凝胶从EB染液中取出。
D、二甲苯腈条带跑出凝胶时停止电泳。

6、琼脂糖凝胶电泳中，DNA分子从电泳仪的负极向正极移动。

7、常见的电泳缓冲液和载样缓冲液在室温保存即可。

8、琼脂糖凝胶配制时，用蒸馏水充分溶解琼脂糖。

9、通常情况下，DNA分子在碱性条件下带（）电。

10、loading buffer包含的两种指示剂中（）的电泳迁移速率较快。

琼脂糖凝胶电泳学习笔记（实验报告）提交

1、请各位同学认真撰写实验报告。实验报告的内容：题目、实验目的、实验原理、实验试剂和用品、实验步骤、实验注意事项，以及PPT中的结果分析和思考题答案。

实验七 质粒DNA的限制性内切酶酶切分析和连接

质粒DNA的限制性内切酶酶切分析和连接单元测试

1、需要ATP作为辅助因子的酶是 。
A、BamH I
B、Hind III
C、T4 DNA 连接酶
D、EcoR I

2、能产生平末端的限制性内切酶是 。
A、EcoR I
B、BamH I
C、Hind III
D、Alu I

3、HindIII的同裂酶是 。
A、BamH I
B、XhoI
C、EcoR I
D、HsuI

4、有关限制性核酸内切酶的理解正确的是 。
A、一种限制酶可以识别多种特定的核苷酸序列
B、其化学本质是DNA
C、一种限制酶能在不同的切点上切割DNA分子
D、主要存在于原核生物中

5、限制性内切酶的识别位点一般是 。
A、不重复的序列
B、简单重复的序列
C、具有回文结构的序列
D、相同碱基排列的序列

6、限制性内切酶的作用实际上就是把DNA上某些化学键打断，一种能对GAATTC专一识别的限制酶，打断的化学键是：
A、G与A之间的键
B、G与C之间的键
C、A与T之间的键
D、磷酸与脱氧核糖之间的键

7、下列关于限制性核酸内切酶识别的叙述正确的是 。
A、从反应类型看，限制性内切酶催化的是一种水解反应
B、限制性内切酶的活性受温度、PH值的影响
C、一种限制性内切酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列
D、限制性内切酶识别序列越短，则该序列在DNA序列中出现的机率越小。

8、星号效应是在非最优条件下某些限制性内切酶对识别和切割序列的特异性下降的现象。

9、连接酶对限制性内切酶切割产生的粘性末端和平末端连接效率没有区别。

10、在连接质粒和外源DNA的限制性内切酶酶切后的片段时，应该把此两种DNA按1:1的摩尔比混合进行连接反应。

实验报告及思考题

1、请各位同学认真撰写实验报告。实验报告的内容时：题目、实验目的、实验原理、实验材料与试剂、实验步骤、实验注意事项，以及以下思考题（如需加入图片，先将图片贴在Word里，再转为PDF格式）： 当载体核外源基因经酶切后得到的是平末端时，（或二者具有不同的粘性末端时）怎样实现载体与外源基因的重组?

实验八 DNA片段回收和纯化

DNA片段回收和纯化单元测试

1、有关胶回收的描述，错误的是 。
A、溶胶不彻底会影响回收结果的纯度
B、可以用去离子水进行洗脱
C、可以用TE（PH8.0）洗脱
D、胶块体积过大时也可直接回收

2、用试剂盒回收时得率较低的可能原因分析不正确的是 。
A、.胶块溶解不完全
B、胶块体积过大，没有用枪头捣碎
C、回收前样品的量太多
D、紫外灯下切胶时间过长，使DNA部分降解

3、3. 洗脱前需要进行预热，这个温度应为 。
A、55℃
B、65℃
C、4℃
D、100℃

4、PCR产物回收的目的是 。
A、去除Taq酶
B、去除多余的引物
C、去除大部分非特异性PCR产物
D、回收特异性PCR产物

5、关于凝胶中DNA回收的说法，正确的是 。
A、高盐吸附，低盐洗脱
B、吸附柱中含有能可逆吸附DNA分子的基质
C、膜结合液中含乙醇
D、漂洗液中含乙醇

6、紫外灯下切胶时，利用无污染的新刀片，是为了防止外源DNA的污染

7、DNA片段越大，和固相基因的结合力越强，越难洗脱，回收率也就越低。

8、把切的两个或多块胶融化后，无论多大体积都用一个管子，转移到一个柱子上可提高胶回收量。

9、凝胶成像仪可直接用来检测PCR产物回收是否成功，且用于检测的产物还能在后续基因克隆实验中直接使用。

10、洗脱液不用完全覆盖吸附膜，所以可以用小与30微升的体积进行洗脱

实验报告及思考题

1、请各位同学认真撰写实验报告。实验报告内容：题目、实验目的、实验原理、实验材料及试剂、实验步骤、实验注意事项及以下思考题（如需上传照片，先将照片导入Word中再转为PDF格式）: 如何检测回收是否成功?

9-10 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化

大肠杆菌感受态细胞的制备与转化单元测验

1、大肠杆菌感受态细胞制备过程中使用的氯化钙溶液的浓度是
A、0.1 mol/L
B、0.1 mmol/L
C、1 mmol/L
D、1 mol/L

2、大肠杆菌热激转化实验过程中所用热激温度及热激时间分别是
A、42℃， 1 min
B、90℃， 1 min
C、42℃， 90 s
D、90℃， 90 s

3、细菌转化中蓝白斑筛选中β-半乳糖苷酶的底物是
A、IPTG
B、X-gal
C、甘油
D、CaCl2

4、大肠杆菌感受态制备时，Cacl2溶液的温度应保持
A、0℃
B、100℃
C、42℃
D、95℃

5、大肠杆菌感受细胞制备过程中，应选择处于什么时期的细菌最合适
A、迟缓期
B、衰亡期
C、稳定器
D、对数期

6、大肠杆菌最适的培养温度
A、30℃
B、25℃
C、37℃
D、4℃

7、为什么化学试剂诱导法被广泛用于外源基因的转化？
A、操作过程简单
B、方法稳定性好
C、可重复性比较高
D、可使用的范围比较广

8、热激法转化大肠杆菌时，感受态细胞经历了0℃-42℃-0℃的过程

9、大肠杆菌感受态制备过程中，要注意冰浴，操作轻柔，无菌

10、大肠杆菌感受态制备过程中，扩大培养后菌液的OD600值到1.4最合适

大肠杆菌感受态细胞的制备与转化作业：实验报告及思考题

1、按照提纲撰写大肠杆菌感受态细胞的制备与转化实验报告并回答思考题。

11-12 农杆菌感受态细胞的制备与转化

农杆菌感受态细胞的制备与转化-单元测验

1、农杆菌的最适培养温度是（）
A、28℃
B、4℃
C、37℃
D、42℃

2、下列关于电击的原理说法错误的是
A、电穿孔时，电流使细胞产生瞬时的“小窝”
B、电穿孔时，会在细胞膜上形成瞬时的疏水“孔隙”
C、一些较大的疏水性孔隙转换为亲水性孔隙，通过附着到细胞膜下面的细胞骨架成分而稳定。
D、电击过程中，用于转化的DNA和感受态细胞中离子浓度越高，转化效率越高

3、下列关于电击法和化学法说法错误的是
A、化学法设备简单便宜（水浴锅）；效率低
B、电击法操作简单，快速；转化效率高，一般比化学法高约10倍
C、电击法对盐离子浓度没有要求
D、电击法可以转化大分子量的质粒

4、制备农杆菌感受态和电击操作时，保持在以下那种条件下有利于转化效率的提高
A、42℃
B、室温
C、95℃
D、0℃-4℃

5、电击法感受态细胞在-70℃温度下储存至多几个月，转化效率不会损失。
A、3个月
B、6个月
C、12个月
D、24个月

6、用分光光度计测菌液OD值时，应调到
A、OD= 412
B、OD=600
C、OD=680
D、0D=700

7、电击法转化效率的影响因素都有哪些？
A、载体DNA及重组DNA
B、受体细胞
C、转化操作
D、储存条件和时间

8、电击转化时，用于转化的DNA和感受态细胞中离子浓度越低，转化效率越高

9、一般具有超螺旋结构的质粒的转化率低于经体外酶切连接操作后的载体DNA或重组DNA。

10、农杆菌受体细胞的转化效率普遍低于大肠杆菌

农杆菌感受态细胞的制备与转化-实验报告及思考题

1、按照提纲撰写农杆菌感受态细胞的制备与转化实验报告并回答思考题。

综合测验

综合测试客观题

1、使用超净工作台进行无菌操作实验前，至少开启紫外灯照射杀菌（ ）。
A、5 分钟
B、10分钟
C、15分钟
D、30分钟

2、制作固体平板时，加入抗生素时所用培养基的适宜温度-般为（ ）。
A、50-60°C
B、20-30°C
C、30-40°C
D、70-80°C

3、配制LB固体培 养基常用的琼脂浓度为（ ）。
A、1.0-2.0%
B、4%
C、3%
D、0.3%

4、LB培养基灭菌的常用方法是（ ）。
A、高压蒸汽灭菌
B、紫外线消毒
C、煮沸法灭菌
D、干热灭菌

5、琼脂在LB固体培养基中的作用是提供（ ）。
A、凝固因子
B、碳源
C、氮源
D、生长因子

6、酒精灯使用时加入工业酒精或95%乙醇应占酒精壶体积的（ ）。
A、2/3
B、1/3
C、1/2
D、全满

7、高压灭菌锅使用前检查水位，水位一般要位于（ ）。
A、高水位和低水位之间
B、高水位之上
C、高水位之下
D、低水位之下

8、碱裂解法提取质粒DNA的基本原理是（ ）。
A、染色体DNA变性后不如质粒DNA复性快
B、染色体DNA断裂成碎片
C、染色体DNA分子量大不能释放
D、染色体未与蛋白质分开而沉淀

9、提取质粒DNA过程中,向氯仿-异戊醇处理的上清液中加入无水乙醇的主要目的是（ ）。
A、浓缩和沉淀质粒DNA
B、去除蛋白
C、去除断裂的基因组DNA
D、去除RNA

10、RTE试剂中能抑制DNA酶活性的化学物质是（ ）。
A、EDTA
B、RNA酶
C、Tris
D、盐酸

11、碱裂解法中第一步试剂中常含有EDTA,其作用是( ) 。
A、螯合镁离子和钙离子,抑制DNase活性
B、裂解细菌
C、调节pH
D、促进RNA水解

12、琼脂糖凝胶电泳胶中的DNA是靠（）发出荧光的？
A、溴化乙锭
B、琼脂糖
C、溴酚蓝
D、二甲苯腈

13、在进行琼脂糖凝胶电泳时，相同时间内（）的迁移距离最远的。
A、200bpDNA分子
B、500bpDNA分子
C、700bpDNA分子
D、溴酚蓝

14、以下获得过诺贝奖的技术方法是（ ）。
A、双分子荧光互补（BiFC）
B、聚合酶链式反应（PCR）
C、酵母双杂交（Y2H）
D、免疫共沉淀（Co-IP）

15、在PCR反应过程中，使用哪三个重要的温度：高温变性、低温退火和（ ）。
A、中温加A
B、中温延伸
C、常温保存
D、常温延伸

16、大肠杆菌感受细胞制备过程中，应选择处于（ ）时期的细菌最合适。
A、迟缓期
B、衰亡期
C、稳定期
D、对数期

17、大肠杆菌感受态制备时，氯化钙溶液的温度应保持（ ）。
A、0℃
B、100℃
C、42℃
D、95℃

18、下列关于蓝白斑筛选说法错误的是（ ）。
A、蓝白斑筛选又称为α-互补
B、蓝白斑筛选中，单独的α片段与ω片段也具有活性的
C、α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶
D、在筛选培养基上，重组质粒的菌落是白色的，非重组质粒的菌落是蓝色的

19、下列关于限制性内切酶的叙述正确的是（ ）。
A、星号效应是在非最优条件下某些限制性内切酶对识别和切割序列的特异性上升的现象
B、连接酶连接限制性内切酶切割产生的粘性末端的连接效率比平末端高
C、在连接质粒和外源DNA的限制性内切酶酶切后的片段时，应该把此两种DNA按1:1的摩尔比混合进行连接反应。
D、已知某限制酶在一环状DNA上有3个识别位点，因此在该酶切割这一环状DNA时，可得到4个片段

20、从转化菌中筛选DNA重组体的常用方法不包括（ ）。
A、杂交筛选
B、质粒的小量快速提取
C、DNA序列测定
D、插入失活

21、下列有关同裂酶的说法错误的是（ ）
A、它们识别的序列完全相同；
B、它们切割方式可以相同也可以不同；
C、有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样；
D、两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点.

22、下列关于PCR产物回收说法中叙述有误的一项是（ ）。
A、洗脱前预热的温度是65℃
B、DNA片段越大，和固相基因的结合力越强，越难洗脱，回收率也就越低
C、回收前样品的量太多可能会造成回收率低的结果
D、溶胶不彻底会影响回收结果的纯度

23、下列关于PCR产物回收试验中的注意事项说法错误的是（ ）
A、切下含有目的基因的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染
B、切胶的过程可以长一些，因为在紫外线下长时间暴露不会引起突变
C、把切的两个或多块胶融化后，无论多大体积都用一个管子，转移到一个柱子上可提高胶回收量
D、切胶时，尽可能小的切下来胶块，以便后续实验的进行

24、农杆菌的最适培养温度是（ ）。
A、37℃
B、28℃
C、4℃
D、42℃

25、分光光度计测量农杆菌扩大培养后的菌液浓度时，应选择（ ）溶液来调零。
A、二蒸水
B、超纯水
C、新鲜YEP液体培养基
D、扩培后的菌液

26、质粒DNA转化农杆菌细胞时最常用的转化方法是（ ）。
A、化学试剂法
B、原生质体转化法
C、电转法
D、共培养转化法

27、电击法感受态细胞在-70℃温度下储存至多（ ）月，转化效率不会损失。
A、三个月
B、六个月
C、12个月
D、24个月

28、下列试剂可用于沉淀DNA的有（ ）。
A、异丙醇
B、无水乙醇
C、无水甲醇
D、75%乙醇

29、实验2慕课视频中提取基因组DNA时，破碎小麦叶片所用的方法( )。
A、液氮研磨
B、加入细胞提取液
C、超声波法
D、冻融法

30、关于实验操作过程中溶液的配制，下列说法正确的是（ ）。
A、配制溶液时，-般先调pH，然后再定容。
B、碱法提取质粒实验中配制溶液1时，可以使用0.5mol/L EDTA母液配制，也可以加入已称量好的EDTA干粉配制。
C、使用酚-氯仿-异戊醇溶液时，需要吸取下层溶液使用。
D、配置好的50mg/ml羧苄青霉素溶液，可以直接使用,不用过滤除菌。

31、以下关于分子生物学实验理论或实验操作描述正确的为（ ）。
A、使用离心机时，一定要将同样重量的离心管对称放入离心转子内让离心机的轴受力平衡。
B、电子天平使用时一定要调水平，并依据称量需求选择不同精度和量程的天平。
C、高压灭菌结束后，压力降到0 Mpa时就可以从高压锅内取出灭菌物品。
D、配制EDTA溶液时，EDTA在酸性条件下才能溶解。

32、关于动物肝脏DNA的提取步骤,以下说法正确的有( ) 。
A、固体NaCl加入时，应分批加入，边加边摇晃，避免局部盐浓度过大。
B、DNA提取过程应避免过酸、过碱、高温及机械张力损伤。
C、玻棒缠绕DNA时,应快速并向同一方向搅拌。
D、大块的肝脏组织可以直接匀浆。

33、碱裂解法提取质粒时，裂解大肠杆菌所需要的成分是（ ）。
A、0.2M NaOH
B、1.0%SDS
C、0.4M Na2CO3
D、0.4M NaHCO3

34、质粒DNA提取过程中可以使用旋涡振荡的操作步骤包括（ ）。
A、菌体重悬
B、加入75%乙醇清洗沉淀的质粒DNA
C、加入溶液I后的菌体裂解
D、加入溶液III后的混匀中和

35、以下关于碱法提取质粒DNA描述正确的是（ ）。
A、碱裂解法分离质粒DNA是根据质粒DNA与染色体DNA的分子量差异而设计的。
B、碱裂解法提取的质粒DNA分子全部具有超螺旋结构。
C、染色体DNA与蛋白SDS钾盐结合在一起形成微溶性复台物， 离心后沉淀中合有染色体DNA ,而上清中含有质粒DNA。
D、碱裂解法提取质粒 DNA 的原理是根据共价闭合环状质粒 DNA 与线性基因组 DNA 之间 在拓扑学上的差异来实现分离的。

36、在琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验中，宇轩同学进行了下列操作，其中错误的是：
A、徒手从微波炉中取出盛有煮沸的琼脂糖溶液的三角瓶。
B、二甲苯腈条带跑出凝胶时停止电泳。
C、将DNA样品滴加在电泳仪的正极端。
D、带上双层手套将凝胶从EB染液中取出。

37、下列属于loading buffer作用的是：（）。
A、溶解琼脂糖
B、增加样品比重，以确保DNA均匀沉入加样孔内。
C、溶液两极的pH保持基本稳定。
D、使样品呈色，使加样操作更方便。
E、预测核酸电泳的速度和位置。
F、螯合Mg2+等阳离子，使DNA酶失活。

38、PCR过程中的注意事项包括（ ）。
A、由于PCR灵敏度非常高，所以应当采取措施以防反应混合物受到污染。
B、操作中所用的PCR管、离心管、吸管头等都只能一次性使用。每加一种反应物，应换新的枪头。
C、设置严格的阳性对照和阴性对照。
D、注意不能有RNA酶的污染。

39、以下关于Taq酶和Pfu酶，描述正确的有（ ）。
A、Taq酶扩增效率高；Pfu酶扩增效率低
B、Taq酶无3’-5’ DNA外切酶活性保真性差；Pfu酶具3’-5’核酸外切酶活性保真性高
C、Taq酶扩增产物末端有A；Pfu酶扩增产物末端没有A
D、Taq酶扩增和Pfu酶扩增效率相似

40、感受态细胞的特点都有（ ）。
A、细菌处于容易吸收外源DNA的状态
B、细菌表面正电荷增加
C、细胞壁和膜通透性增加
D、是一种敏感细胞

41、为什么化学试剂诱导法被广泛用于外源基因的转化？
A、操作过程简单
B、方法稳定性好
C、可重复性比较高
D、可使用的范围比较广

42、关于大肠杆菌转化实验，下列说法正确的是（ ）。
A、42℃热激后，要放到冰浴2min再进行下一步实验
B、在复苏过程中，加入的是无抗的LB液体培养基
C、在感受态细胞中加入连接产物后，直接进行42℃热激90s
D、热激法转化大肠杆菌时，感受态细胞经历了0℃-42℃-0℃的过程

43、大肠杆菌热激转化过程中要注意（ ）。
A、冰浴
B、无菌
C、动作轻柔
D、剧烈震荡

44、有关限制性核酸内切酶的理解错误的是（ ）。
A、限制性内切酶的识别位点一般是相同碱基排列的序列
B、主要存在于原核生物中
C、有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率是相同的
D、同裂酶两种酶切割序列不完全相同，但却能产生相同的粘性末端，而同尾酶识别核苷酸顺序项同但切割位置不一定相同

45、下列因素中影响限制酶切割的有（ ）
A、酶自身活性
B、盐浓度
C、DNA纯度
D、甘油浓度

46、胶回收时得率低的可能原因分析正确的是（ ）。
A、回收率低可能是因为溶解不充分，造成一部分目的基因存在于胶中
B、紫外灯下切胶时间过长，使DNA部分降解
C、回收前样品太少导致回收率低
D、洗脱次数太少，有目的基因没有被洗脱下来

47、下列关于农杆菌介导的植物转基因的特点说法正确的是（ ）。
A、可插入大片段的外源基因
B、费用昂贵，且重复性不好
C、操作简单，不需要特殊仪器
D、T-DNA可以在目标宿主植物染色体的任何区域插入

48、PCR产物回收的目的是（ ）。
A、去除Taq酶
B、去除多余的引物
C、去除大部分非特异性PCR产物
D、回收特异性PCR产物

49、如果想构建A基因的转基因植物，主要步骤有（ ）。
A、提取模板DNA，并进行PCR扩增
B、酶切连接到双元载体，转入大肠杆菌
C、提质粒，转化农杆菌
D、农杆菌介导A基因转入植物

50、下列关于电击的原理说法正确的是（ ）。
A、电穿孔时，电流使细胞产生瞬时的“小窝”
B、电穿孔时，会在细胞膜上形成瞬时的疏水“孔隙”
C、一些较大的疏水性孔隙转换为亲水性孔隙，通过附着到细胞膜下面的细胞骨架成分而稳定
D、电击过程中，用于转化的DNA和感受态细胞中离子浓度越高，转化效率越高

51、下列关于电击法和化学法说法正确的是（ ）。
A、化学法设备简单便宜（水浴锅）；效率低
B、电击法操作简单，快速；转化效率高，一般比化学法高约10倍
C、电击法对盐离子浓度没有要求
D、电击法可以转化大分子量的质粒

52、制作酒精棉球常用的酒精浓度为（ ）%。（请以数值表示）

53、0.5mM EDTA 配置过程中，应将pH调节为（ ）。（请保留小数点后一位）

54、酚-氯仿-异伐醇试剂中（ ）的作用是使水相和有机相分界更为明显。 （请填写试剂名称）

55、（ ）是独立于细菌染色体外，能自主复制的遗传因子，可以稳定地遗传细菌的某些性状 。

56、琼脂糖凝胶电泳主要利用（）达到分离DNA的目的。

57、dNTP包括dATP、（ ）、dGTP、dCTP。

58、大肠杆菌感受态细胞制备过程中使用的氯化钙溶液的浓度是（ ）。

59、蓝白斑筛选中β-半乳糖苷酶的底物是（ ）。

60、制备感受态和电击操作时过程一定保证在（ ）℃进行，有利于转化效率的提高，室温进行电击，转化效率降低高达100倍。（请以阿拉伯数字表示）

61、Ⅱ型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有 的专一性。作用时一般需要 Tris-HCl 调节PH，Mg2+离子作辅助因子。

62、质子化的Resin(树脂)离心柱具有在 情况下吸附DNA的性质。

63、一般经体外酶切连接操作后的载体DNA或重组DNA其转化率低于具有超螺旋结构的质粒是由于其（ ）发生改变。

综合测验主观题

1、

2、

中国大学分子生物学实验_3

本实验是分子生物学实验系列的第三个实验。在本实验中，我们将学习DNA的克隆技术以及PCR技术。

DNA克隆技术

DNA克隆技术是一种将特定DNA片段复制成大量同样的DNA分子的方法。这项技术对于研究DNA序列、生物学和医学的各个领域都非常有用。

在DNA克隆技术中，我们首先需要获取到需要克隆的DNA片段。这个过程可以通过PCR技术或者DNA文库筛选等方法完成。

接下来，我们需要将克隆的DNA片段插入到载体DNA中，创建一个重组DNA分子。载体DNA可以是细菌质粒、病毒或者人工合成的DNA分子。

插入DNA片段的方法通常是使用酶切和粘性末端连接技术。通过使用限制性内切酶将载体DNA和DNA片段切割，可以在两个DNA分子的末端形成互补配对的黏性末端。然后，使用DNA连接酶将两个分子连接在一起。

最后，我们需要将重组DNA分子转化到细胞中，以便进行大量的复制。这个过程可以通过细胞转化技术完成，通常使用化学方法或者电穿孔法。

PCR技术

PCR技术是一种可以快速扩增DNA片段的方法。这个技术可以从非常少量的DNA起始物开始扩增，因此非常适合用于研究和诊断等领域。

在PCR技术中，我们需要选择一对引物，这对引物是针对需要扩增的DNA片段设计的。引物通常是20-30个核苷酸长的DNA序列，可以在DNA序列的两端选择。

接下来，我们需要将DNA模板、引物、dNTPs和酶混合在一起。酶通常是一种具有扩增酶活性的热稳定DNA聚合酶，如Taq聚合酶。

PCR过程通常包括三个步骤：变性、退火和扩增。在变性步骤中，DNA模板被加热至95℃，以使其双链DNA分离成两条单链DNA。在退火步骤中，引物与模板DNA的互补序列形成牢固的配对。在扩增步骤中，酶将dNTPs添加到引物的3'端，在每个循环中将DNA的两端扩增。

PCR技术可以在几小时内扩增数百万甚至数十亿个DNA分子。这项技术在基础研究、医学诊断和生物技术等领域都非常有用。

结论

通过本实验，我们学习了DNA克隆技术和PCR技术。这两个技术都可以用于研究和诊断等领域，具有非常重要的应用价值。

未来，我们还可以学习更多的分子生物学技术，扩展我们对生物世界的了解。