超星生物化学与分子生物学综合实验期末答案(学习通2023课后作业答案)

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1 无菌操作技术与主要仪器设备的超星使用

无菌操作技术与主要仪器设备的使用单元测验

1、1. 使用超净工作台进行无菌操作实验前，生物实验至少开启紫外灯照射杀菌 。化学后作
A、分生5min
B、物学15min
C、综合30min
D、期末10min

2、答案制作固体平板时，学习加入抗生素时所用培养基的通课适宜温度一般为 。
A、业答20-30℃
B、超星30-40℃
C、生物实验50-60℃
D、化学后作70-80℃

3、分生制作酒精棉球常用的酒精浓度为 。
A、50%
B、75%
C、85%
D、95%

4、配制LB固体培养基常用的琼脂浓度为 。
A、1.0-2.0%
B、4%
C、3%
D、0.3%

5、LB培养基灭菌的常用方法是 。
A、紫外线消毒
B、煮沸法灭菌
C、高压蒸汽灭菌
D、干热灭菌

6、琼脂在LB固体培养基中的作用是提供 。
A、碳源
B、氮源
C、生长因子
D、凝固因子

7、关于视频中溶液的配制，下列说法正确的是 。
A、配制溶液时，一般先调pH，然后再定容。
B、使用酚-氯仿-异戊醇溶液时，需要吸取下层溶液使用。
C、配制溶液Ⅰ时，可以使用0.5mol/L EDTA母液配制，也可以加入已称量好的EDTA干粉配制。
D、配置好的50mg/mL羧苄青霉素溶液，可以直接使用，不用过滤除菌。

8、使用离心机时，一定要将同样重量的离心管对称放入离心转子内让离心机的轴受力平衡。

9、电子天平使用时一定要调水平，并依据称量需求选择不同精度和量程的天平。

10、高压灭菌结束后，压力降到0 Mpa时就可以从高压锅内取出灭菌物品。

11、配制EDTA溶液时，EDTA在碱性条件下才能溶解。

12、以水为溶剂配制的抗生素溶液需要过滤除菌后才能使用。

13、一般Tris 饱和酚用于分离 DNA，水饱和酚用于分离RNA

2 琼脂糖凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳单元测验

1、琼脂糖凝胶电泳检测2000bpDNA时，比较合适的凝胶浓度是 。
A、0.5%
B、1%
C、3%
D、4.5%

2、关于核酸染料GoldView的说法，错误的是 。
A、使用时带手套
B、GoldView的工作浓度为5μL/100mL胶液
C、凝胶溶液温度降到50-60℃时方可加入GoldView
D、GoldView对皮肤眼睛没有刺激作用

3、相同分子大小的超螺旋DNA分子和线性DNA分子在琼脂糖凝胶中进行电泳时，它们的迁移快慢顺序是 。
A、超螺旋DNA分子快，线性DNA分子慢
B、超螺旋DNA分子慢，线性DNA分子快
C、两者一样快
D、两者一样慢

4、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，影响蛋白样品迁移率的因素是 。
A、所带电荷多少
B、蛋白形状
C、蛋白分子大小
D、蛋白浓度

5、最适合用来分离100KD蛋白的聚丙烯酰胺凝胶的T值是 。
A、20%
B、15%
C、10%
D、5%

6、对不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳说法，不正确的是 。
A、包括2层凝胶（分离胶和浓缩胶），两层凝胶的缓冲液pH和凝胶孔径大小都不连续
B、电泳时，样品先进入浓缩胶被浓缩，然后进入分离胶得以分离
C、整个电泳体系中的缓冲液pH 值和凝胶孔径大小相同
D、主要用于蛋白质样品的分离与分析

7、检测核酸的常用染料有 。
A、EB
B、SYBR
C、GoldView
D、考马斯亮蓝

8、琼脂糖凝胶电泳的全过程包括 。
A、凝胶的制备
B、制样和上样
C、电泳
D、检测

9、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本过程包括 。
A、制备分离胶
B、制备浓缩胶
C、电泳
D、检测

10、DNA分子在含1×TAE电泳缓冲液的琼脂糖凝胶电泳中从正极向负极迁移。

11、琼脂糖凝胶电泳时，一般在每厘米凝胶20-30V的恒压下进行。

12、制备琼脂糖凝胶时，可以直接用蒸馏水配置凝胶溶液。

13、配聚丙烯酰胺凝胶时先配浓缩胶再配分离胶。

14、蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳必须使用SDS，如果没有SDS处理电泳结果毫无意义。

15、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白的迁移率与其分子量成线性关系。

3 目的基因AKP扩增及PCR产物的检测与回收

目的基因AKP及PCR产物的检测与回收单元测验

1、有关PCR的描述，错误的是 。
A、PCR反应是一种酶促反应
B、一般选用94℃进行模板变性
C、扩增的对象是DNA序列
D、扩增的对象是氨基酸

2、PCR实验的特异性主要取决于 。
A、DNA聚合酶的种类
B、反应体系中模板DNA的量
C、引物序列的结构和长度
D、四种dNTP的浓度

3、PCR产物短期存放的最佳温度条件是 。
A、4℃
B、常温
C、-80℃
D、高温

4、Taq?DNA聚合酶的最适温度是 。
A、37℃
B、50-55℃?
C、70-75℃?
D、80-85℃

5、PCR产物回收的目的是 。
A、去除Taq酶
B、去除多余的引物
C、去除大部分非特异性PCR产物
D、回收特异性PCR产物

6、关于凝胶中DNA回收的说法，正确的是 。
A、高盐吸附，低盐洗脱
B、吸附柱中含有能可逆吸附DNA分子的基质
C、膜结合液中含乙醇
D、漂洗液中含乙醇

7、PCR中的引物是一小段同DNA互补的RNA分子。

8、PCR反应的循环过程包括变性、退火和延伸。

9、PCR具有特异性、高效性和操作简单等特点。

10、凝胶成像仪可直接用来检测PCR产物回收是否成功，且用于检测的产物还能在后续基因克隆实验中直接使用。

4 质粒DNA提取及电泳检测

质粒DNA提取及电泳检测单元测验

1、用碱裂解法提取质粒DNA的基本原理是 。
A、染色体DNA断裂成碎片
B、染色体DNA分子量大不能释放
C、染色体DNA变性后不如质粒DNA复性快
D、染色体未与蛋白质分开而沉淀

2、提取质粒DNA过程中，向氯仿-异戊醇处理的上清液中加入无水乙醇的主要目的是 。
A、去除蛋白
B、去除断裂的基因组DNA
C、浓缩和沉淀质粒DNA
D、去除RNA

3、RTE试剂中能抑制DNA酶活性的化学物质是 。
A、EDTA
B、RNA酶
C、Tris
D、盐酸

4、关于碱裂解法分离质粒DNA的说法，错误的是 。
A、溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体
B、溶液Ⅱ的作用是使DNA变性
C、溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
D、质粒DNA分子小没有变性

5、碱裂解法提取质粒时，裂解大肠杆菌所需要的成分是 。
A、0.2M NaOH
B、0.4M Na2CO3
C、0.4M NaHCO3
D、1.0% SDS

6、质粒DNA提取过程中可以使用旋涡振荡的操作步骤包括 。
A、菌体重悬
B、加入溶液Ⅱ后的菌体裂解
C、加入溶液Ⅲ后的混匀中和
D、加入75%乙醇清洗沉淀的质粒DNA

7、碱裂解法分离质粒DNA是根据质粒DNA与染色体DNA的分子量差异而设计的。

8、染色体DNA与蛋白-SDS钾盐结合在一起形成微溶性复合物，离心后沉淀中含有染色体DNA，而上清中含有质粒DNA。

9、碱裂解法提取的质粒DNA分子全部具有超螺旋结构。

10、酚-氯仿-异戊醇试剂中氯仿的作用是使水相和有机相分界更为明显。

5 重组DNA的制备及大肠杆菌感受态细胞的转化

重组DNA的制备及大肠杆菌感受态细胞的转化单元测验

1、需要ATP作为辅助因子的酶是 。
A、BamH I
B、Hind III
C、T4 DNA 连接酶
D、EcoR I

2、能产生平末端的限制性内切酶是 。
A、EcoR I
B、BamH I
C、Hind III
D、Alu I

3、用于转化大肠杆菌感受态细胞且能在平板上长出菌落的物质是 。
A、质粒DNA
B、目的基因
C、基因组DNA
D、CDNA

4、在蓝白斑筛选中，可做为β-半乳糖苷酶的底物是 。
A、IPTG
B、X-gal
C、磷酸钠
D、EDTA

5、HindIII的同裂酶 是 。
A、BamH I
B、XhoI
C、EcoR I
D、HsuI

6、大肠杆菌热激转化实验过程中，常用的热激温度和时间分别是 。
A、80℃ 90 s
B、4℃ 90s
C、42℃ 90 s
D、70℃ 90 s

7、制备大肠杆菌感受态细胞的实验操作过程中，需要注意 。
A、无菌
B、动作轻柔
C、冰浴保持低温
D、可以使用旋涡振荡仪振荡混匀

8、大肠杆菌感受态细胞制备及转化的步骤包括 。
A、细胞扩增
B、感受态细胞制备
C、转化
D、复苏

9、星号效应是在非最优条件下某些限制性内切酶对识别和切割序列的特异性下降的现象。

10、限制性内切酶对粘性末端和平末端切割效率没有区别。

11、在连接质粒和外源DNA的限制性内切酶酶切后的片段时，应该把此两种DNA按1:1的摩尔比混合进行连接反应。

12、在转化过程中，热激后加入LB液体培养基进行复苏，复苏可以使细胞得到修复，同时使抗性基因得到表达

6 阳性重组子的筛选

阳性重组子的筛选单元测验

1、不能用来筛选重组子的筛选方法是 。
A、抗药性筛选
B、蓝白筛选
C、限制性酶切法
D、PCR 法

2、可以确保重组子中的外源基因没有突变的方法是 。
A、蓝白筛选
B、核酸杂交
C、DNA测序
D、PCR法

3、可以用来确定所表达的蛋白是否具有功能的方法是 。
A、ELISA
B、SDS-聚丙烯酰胺电泳
C、测试酶活
D、Western blot

4、使用克隆时同样的限制性内切酶切割4KB质粒载体和1KB外源DNA重组形成的重组质粒后，琼脂糖电泳分析的结果是 。
A、一条5KB的条带
B、两条条带，分别时2KB和3KB
C、两条条带，分别是1KB和4KB
D、一条4KB的条带

5、常用的核酸水平筛选重组子方法有 。
A、PCR法
B、直接电泳检测法
C、限制性酶切图谱法
D、核酸杂交检测法

6、筛选可以判定某个克隆是重组子还是非重组子。

7、PCR法可以确定某个克隆是否是重组子，但是无法确定其重组质粒中外源DNA的大小是否正确。

8、限制性酶切筛选法只能确定是转化子还是非转化子。

9、测定酶活性和蛋白分子大小是蛋白水平的筛选。

10、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳可以对目标蛋白的表达进行粗略筛选。

11、阳性重组质粒DNA转化表达菌株以便获得表达工程菌，还可在蛋白水平进一步筛选目的重组子。

7外源基因的诱导表达

外源基因的诱导表达单元测验

1、基因表达不涉及的步骤是 。
A、复制
B、转录
C、翻译
D、蛋白折叠

2、在大肠杆菌中表达外源基因不需要 。
A、启动子
B、核糖体结合序列
C、复制起点
D、起始密码子

3、Lac表达体系中，能够解除阻遏蛋白阻遏作用的物质是 。
A、葡萄糖
B、乳糖
C、半乳糖
D、果糖

4、T7表达体系不需要 。
A、T7 RNA 聚合酶
B、T7启动子
C、Lac 阻遏蛋白
D、Taq DNA聚合酶

5、实验中诱导菌株表达碱性磷酸酶AKP的诱导物IPTG的浓度是优化后得到，优化IPTG的依据是 。
A、蛋白表达温度
B、蛋白表达时间
C、蛋白质表达量和蛋白酶活性
D、蛋白稳定性

6、本实验中，加入诱导物诱导AKP表达所要求的细菌生长密度（即OD600为多少）大约是 。
A、0.1
B、0.8
C、1.5
D、无所谓

7、关于外源基因的诱导表达的说法，正确的是 。
A、扩大培养细胞需要细菌生长到合适的生长密度才可诱导表达
B、该实验表达AKP使用的诱导物是IPTG
C、表达蛋白需要使用表达菌株，而不是克隆菌株
D、加入诱导物后，可以在37度诱导表达

8、在诱导表达外源基因时，通常需要优化培养条件以便得到可溶的、较好的蛋白表达量和蛋白酶活性，实验中一般可以优化哪些条件 。
A、培养表达温度
B、诱导物的浓度
C、培养基的组成
D、培养基pH

9、可以在任何大肠杆菌中利用T7表达体系表达任何外源基因。

10、基因工程使用的菌株经常通过突变消除了葡糖糖效应。

11、稀有密码子会影响到翻译的效率。

12、外源基因在大肠杆菌中诱导表达不同蛋白， 使用的温度可能不同，可以是低温如16度表达，也可能是37度表达。

13、离心收集菌液时，需要先使用天平平衡才能离心，离心时可以不带离心管盖平衡。

14、不同的启动子其有不同的启动效率。

8 外源基因表达产物的检测

外源基因表达产物的检测单元测验

1、测试细胞内碱性磷酸酶活性不需要的实验步骤是 。
A、离心
B、细胞破碎
C、加入测活液
D、16℃水浴恒温10min

2、不常用的细胞破碎法是 。
A、超声破碎
B、噬菌体破碎
C、研磨
D、使用溶菌酶破碎

3、可终止利用对硝基苯酚磷酸测试碱性磷酸酶活性反应的终止液是 。
A、氯化钠
B、磷酸钠
C、硫酸钠
D、醋酸钠

4、Western blot实验不需要的步骤 。
A、封闭
B、显色
C、脱色
D、漂洗

5、实验中使用超声方法破碎细胞时，超声破碎的条件包括时间、功率等是通过实验摸索出来的，摸索的依据是 。
A、蛋白表达多少
B、细胞破碎的程度
C、破碎后样品的活性
D、蛋白是否是可溶性表达

6、Western blot实验需要 。
A、一抗溶液
B、5%脱脂奶粉
C、PBS缓冲液
D、BamH I

7、将凝胶、NC膜、滤纸浸泡印迹缓冲液的作用是 。
A、使凝胶中的SDS游离出来
B、增加NC膜的结合容量
C、提高NC膜与蛋白的亲和力
D、封闭NC膜上的吸附位点

8、Western blot中，印迹时蛋白样品从凝胶上转移到NC膜上。

9、细胞可以通过反复冻融来破碎。

10、利用对硝基苯酚磷酸作为底物来测试碱性磷酸酶活性其产物呈现红色。

11、Western blot实验在转膜后必须有封闭过程。

12、Western blot中其二抗必须通过将待测蛋白免疫小鼠来获得。

13、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可用来测定蛋白亚基分子量。

作业1

1、根据课程中，实验3—实验8“AKP表达菌株的构建及其表达分析”的实验内容的学习，请思考如何构建一个含有外源基因的克隆菌株？

作业2

1、如何确认经过DNA重组克隆表达出的蛋白就是目的蛋白？

9 凝胶过滤层析分离标准蛋白

凝胶层析法分离标准蛋白单元测验

1、下列对凝胶层析的称呼，错误的是 。
A、分子筛层析
B、凝胶过滤层析
C、凝胶排阻层析
D、输水层析

2、凝胶层析能够分离各组分的原理是 。
A、待分离组分的分子大小不同
B、待分离组分所带电荷数不同
C、待分离组分在流动相和固定相之间分配系数不同
D、待分离组分能够与某些相对应的专一分子特异识别和可逆结合

3、本次凝胶层析中使用的介质是Sephacryl S-200 HR，其分离范围是 。
A、1×103~ 100×103
B、5×103 ~ 250×103
C、10×103 ~ 1500×103
D、20×103 ~ 2500×103

4、凝胶层析中某一溶质在凝胶内部和外部的分配系数，也就是Kd值，与下面哪个因素有关 。
A、柱子的长短
B、被分离物质分子的大小
C、凝胶颗粒孔隙的大小分布
D、柱的粗细

5、在实际工作中，我们通常使用Kav，也就是有效分配系数来代替Kd。计算Kav的话，需要测定出哪些参数 。
A、内水体积Vi
B、外水体积Vo
C、柱体积Vt
D、洗脱体积Ve

6、影响凝胶层析柱选择性的因素有 。
A、层析介质
B、柱长
C、待分离样品的形状
D、流速

7、凝胶层析中，比凝胶孔径大的分子最先被洗脱出来。

8、对于某一型号的凝胶，在一定的分子量范围内，各个组分的Kav与其分子量的对数成非线性关系。

9、实际工作中，我们经常使用操作压来装柱和平衡。操作压是指层析柱内液面与出水口的高度差，或者是贮液器内液面与出水口的高度差。

10、凝胶层析柱中有肉眼可见的小气泡，对分离效果影响不大。

10 蛋白浓度及酶活性的测定

蛋白浓度及酶活性的测定单元测验

1、以下测活方法中，最常用的是 。
A、分光光度法
B、荧光法
C、同位素测定法
D、电化学方法

2、测活时，需要测定酶促反应的初速率，其目的是 。
A、节约底物
B、尽快完成测定工作
C、减少其他因素的影响
D、准确反映酶的真实催化能力

3、乳酸脱氢酶催化的反应中，通过测定，得知在最适反应条件下，在0.1ml酶样品的作用下，每10分钟有0.3摩尔的丙酮酸分子被还原为乳酸，则1 ml酶样品所含的酶活力国际单位（IU）数为 。
A、3,000
B、30,000
C、300,000
D、3,000,000

4、连续法测活的正确步骤是 。 ①利用分光光度计连续测定吸光度的变化 ②将适量酶加入底物溶液中，快速混合 ③利用吸光度变化的动力学曲线计算酶活力 ④将酶与底物的混合液迅速转移入比色杯中，放入分光光度计
A、①②③④
B、②④①③
C、③④①②
D、②①④③

5、测定蛋白质浓度（含量）常用的方法有 。
A、凯氏定氮法
B、Folin-酚试剂法
C、考马斯亮蓝G-250法
D、紫外光吸收法

6、考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质浓度的过程包括 。
A、配制标准蛋白质溶液如1mg/mL BSA
B、制作标准曲线
C、测定待测样品蛋白质浓度
D、根据标准曲线计算待测样品蛋白质浓度

7、下列关于酶活力测定的描述中，错误的是 。
A、酶活力的大小可通过测定反应物浓度的减少量或底物浓度的增加量来确定
B、1个酶活力国际单位是指在最适反应条件下，1 分钟内能催化1mol底物转化为产物所需的酶量
C、酶促反应速率越快，表明酶活力越高
D、酶活力测定的最适温度通常是37摄氏度

8、在用终止法测定酶活力时，以下哪些物质可用于配制终止液 。
A、蛋白质变性剂
B、酶的抑制剂
C、酶的激活剂
D、金属离子螯合剂

9、在测定酶活力的实验中，底物的数量与酶的数量相比是过量的。

10、在测定酶活力时，通常测定产物浓度的变化，用于计算酶活力的大小。

11、在利用分光光度法测定酶活力时，吸光度的值总是由小变大。

12、在测定酶活力的实验中，将底物溶液加入酶溶液中。

13、紫外光吸收法可用于测定含有酪氨酸、色氨酸与苯丙氨酸的蛋白质样品的含量或浓度。

11碱性磷酸酶AKP的分离纯化

碱性磷酸酶AKP的分离纯化单元测验

1、下面哪种层析方法是依据蛋白分子量大小分离蛋白混合物的 。
A、离子交换层析
B、疏水层析
C、亲和层析
D、凝胶过滤

2、在pH 7.0的缓冲条件下，下面哪种等电点的蛋白可以用阴离子交换树脂分离纯化 。
A、5.0
B、7.0
C、8.5
D、9.0

3、细胞破碎的正确方法包括 。
A、加热
B、激光
C、超声破碎
D、加入噬菌体

4、外源蛋白可以通过下列哪种途径表达 。
A、E.coli
B、昆虫细胞
C、啤酒酵母
D、哺乳动物细胞

5、蛋白的哪种特性可以用来粗纯化 。
A、是否结合金属
B、热稳定
C、等电点
D、疏水性

6、蛋白哪种性质可以用来设计层析实验对其进行纯化 。
A、分子大小
B、等电点
C、热稳定
D、与特定抗体的结合

7、下面哪种层析技术中蛋白是先被吸附到了介质上 。
A、离子交换层析
B、疏水层析
C、亲和层析
D、凝胶过滤层析

8、下面哪种方法是常用浓缩蛋白的方法 。
A、超滤
B、盐析
C、真空冷冻干燥
D、蒸发浓缩

9、如果蛋白可以利用亲和层析分离纯化，那么通常会首先考虑亲和层析。

10、设计纯化实验时，尽量不要利用相似原理的纯化步骤进行多步纯化。

11、在超声破碎时，可以连续超声5分钟，这样可以快速完成细胞破碎。

12、如果蛋白无法可溶表达，有时候可以加上一个标签使它以融合蛋白的形式表达可以得到可溶的表达产物。

12 AKP蛋白纯化方案的评估

碱性磷酸酶分离纯化参数的测定单元测验

1、下面哪些是蛋白纯化中我们需要评估的指标 。
A、蛋白纯度
B、蛋白回收率
C、提纯倍数
D、蛋白分子量

2、下面哪种方法能够评估蛋白的样品均一性 。
A、SDS-PAGE
B、酶活测试
C、Native PAGE
D、凝胶过滤

3、下面哪种方法不能够评估蛋白的纯度 。
A、SDS-PAGE
B、离子交换
C、酶活测试
D、质谱

4、如果有一个蛋白A， 其分子量为40 KD。 它在Native PAGE上产生两条条带，下面哪种说法有可能具有合理性 。
A、两条条带分别为单体和二聚体
B、两条条带分别为单体和某个降解产物
C、两条条带分别为单体和四聚体
D、两条条带分别为二聚体和四聚体

5、纯化蛋白时不一定是越多的纯化步骤效果就越好。

6、如果在SDS-PAGE上看到一条条带，我们可以断定该蛋白的纯度已经达到100%。

7、通过SDS-PAGE我们可以判断蛋白单体的分子量。

8、Native PAGE不能用于判定蛋白的分子量。

9、通过Native PAGE我们可以判定蛋白的聚合形式。

10、SDS-PAGE只能检测纯度但是无法检测样品的均一性。

14 AKP的动力学性质分析

AKP的动力学性质分析单元测验

1、根据稳态理论，酶促反应开始后，在一定时间内可保持不变的是 。这是推导米氏方程的重要前提。
A、[S]
B、[P]
C、[ES]
D、[EP]

2、对于遵守米-曼氏动力学的酶来说，当底物浓度等于2Km时，酶促反应速率与Vmax之比为 。
A、1/2
B、2/3
C、3/4
D、4/3

3、为测定kcat值，首先需要测定 的值。
A、KI
B、Vmax
C、Km
D、Vmin

4、酶促反应的各动力学参数中，与酶浓度无关的是 。
A、Ks
B、Vmax
C、Km
D、kcat

5、以下关于Km的描述中，正确的是 。
A、Km在数值上等于酶促反应速度为最大反应速率一半时的底物浓度
B、Km的大小与酶的浓度有关
C、同一种酶针对不同底物有不同Km值
D、Km值可用来精确地表示酶与底物之间的亲和程度

6、测定底物浓度对酶促反应速率的影响作用时，需要注意的问题包括 。
A、底物浓度需要过量
B、考虑酶溶液的加入对底物浓度的影响作用
C、严格控制反应条件（温度、pH值等）
D、严格控制反应时间

7、酶促反应过程中，每一时刻的瞬时速率都不一样。

8、如果酶促反应在刚开始的一段时间内反应速率保持不变，则此段时间内的平均速率就能代表反应初速率。

9、测定底物浓度对酶促反应速率的影响作用时，需要保持酶浓度不变。

10、对于遵守米-曼氏动力学的酶来说，在双倒数图中，其动力学曲线与横轴的交点的数值为1/Km。

15AKP的特性分析

AKP的特性分析单元测验

1、酶的反竞争性抑制剂具有下列哪种动力学效应 。
A、使Vmax'不变，Km'增大
B、使Vmax'减小，Km'不变
C、使Vmax'减小，Km'增大
D、使Vmax'减小，Km'减小

2、在利用酶促反应动力学方法研究抑制剂的作用机制时，所做出的双倒数图中，一组在横轴上交于一点的直线对应 。
A、竞争性抑制剂
B、非竞争性抑制剂
C、反竞争性抑制剂
D、不可逆抑制剂

3、已知反竞争性抑制剂的浓度 [I] = 2Ki，底物浓度 [S] = 5Km，则根据米氏方程计算出的反应速率v 等于 。
A、3Vmax/8
B、5Vmax/8
C、3Vmax/16
D、5Vmax/16

4、能够与酶、底物形成三元复合物的抑制剂是 。
A、竞争性抑制剂
B、反竞争性抑制剂
C、非竞争性抑制剂
D、别构抑制剂

5、以下描述中，属于pH值的变化影响酶活力因素的是 。
A、pH过高或过低，可导致酶的变性
B、pH的改变影响酶活性部位的构象
C、pH的改变影响与酶催化功能相关的基团的解离状态
D、pH的改变影响产物的解离状态

6、研究抑制剂对酶活力影响作用的实验中，正确的做法是 。
A、固定酶与底物的浓度不变，只改变抑制剂浓度，测定Km、Vmax等动力学常数
B、严格控制反应条件（温度、pH值等）
C、重复实验，降低偶然误差
D、利用双倒数作图法判断可逆抑制剂的类型

7、竞争性抑制剂的结构与底物具有相似性。

8、非竞争性抑制剂可导致酶的永久性失活。

9、增加测活时间可导致测定出的酶最适温度降低。

10、金属离子的螯合剂是金属酶的激活剂。

16 AKP多克隆抗体的制备及检测

AKP多克隆抗体的制备及检测单元测验

1、利用免疫小鼠获得血清，从而制备多克隆抗体，优点是 。
A、抗原用量少
B、腹水经简单处理就可用于蛋白质免疫印迹实验、ELISA等用途
C、特异性很高
D、可以大量制备

2、抗原可以是如下什么分子 。
A、大分子的蛋白质
B、病原体
C、多肽
D、糖

3、间接酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测抗体效价的基本实验过程包括 。
A、包被抗原
B、封闭
C、加待测抗体及酶标抗体
D、显色及检测

4、酶联免疫吸附测定法（ELISA）常用的类型有哪些 。
A、直接法
B、间接法
C、竞争法
D、双抗体夹心法

5、抗体的生物学功能包括 。
A、特异结合相应抗原，介导多种生理和病理效应
B、激活补体系统
C、通过其Fc段与多种细胞表面的Fc受体结合，激发不同效应功能
D、免疫调节，有正、负两方面

6、ELISA方法中有3种必要的试剂，分别是 。
A、与固相载体结合的抗原或抗体(为免疫吸附剂)
B、酶标记的抗原或抗体(标记物)
C、酶作用的底物(显色剂)
D、碱性磷酸酶

7、ELISA测定的对象可以是抗体也可以是抗原。

8、初次免疫小鼠时，最好用弗氏不完全佐剂，再次免疫时才使用弗氏完全佐剂。

9、再次抗原刺激与初次抗原刺激引起的免疫反应强度差不多。

10、ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应，与酶对底物的高效催化作用 相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。

11、直接法ELISA是先将待测抗原吸附在固相载体上，这个过程称为包被。然后加入酶标抗体，最后加入底物显色。多用此法检测抗原。

12、ELISA具有操作方便，易重复，灵敏度可高达ng至pg，所需仪器设备简单，特异性强等特点。

13、抗原越纯，获得抗体的特异性越高。

14、一个抗原只具有一个抗原决定簇 。

17 实时荧光定量PCR方法检测小鼠脾细胞特定基因的表达

实时荧光定量PCR方法检测小鼠脾细胞特定基因的表达单元测验

1、RT-PCR获得目的基因时为什么要先提取RNA再反转录 。
A、RNA稳定性高，不易被降解
B、RNA可检测出基因表达的差异
C、RNA为单链线性分子，结构简单
D、以上都是

2、哪种方法可以破坏RNA酶活性 。
A、煮沸
B、温和变性剂
C、乙二胺四乙酸（EDTA）
D、焦磷酸二乙酯（DEPC）

3、以下哪项不是抑制或破坏RNA酶活性的做法 。
A、所用器皿和耗材两次高压灭菌
B、0.1 % DEPC溶液处理
C、尽量简化操作步骤
D、EDTA溶液处理

4、关于RNA特性的描述不正确的是 。
A、是单链线性分子
B、具有不稳定性，易被降解
C、易被RNA酶破坏
D、RNA较稳定

5、RNA酶内有 使其耐热，耐酸碱。
A、氢键
B、二硫键
C、离子键
D、共价键

6、焦磷酸二乙酯（DEPC），分子式为C6H10O5，下面说法不正确的是 。
A、是一种强烈RNA酶变性剂，但不可用于内源RNA酶
B、与RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使其变性，从而抑制酶的活性
C、无刺激性，不用在通风橱中使用
D、一定条件下，可降解成二氧化碳和水

7、粗提RNA时，加入氯仿后的现象为 。
A、酸性酚-氯仿抽提，低PH值的酚将使RNA进入水相，蛋白和DNA留在有机相。
B、苯酚和脂类溶于有机溶剂氯仿中形成有机相。
C、氯仿密度较大，使得有机相位于下层，而水相在上层。
D、RNA在下层有机相

8、关于异硫氰酸胍在RNA提取中的作用描述正确的是 。
A、裂解细胞
B、使得核酸蛋白复合物分离
C、抑制细胞释放的核酸酶
D、降解DNA

9、用液氮研磨来破碎细胞，是物理法，不是化学法。

10、该实时定量PCR实验过程中，使用了基因actin做内参。

18 农杆菌介导的植物转基因技术（研学）

农杆菌介导的植物转基因技术单元测验

1、关于穿梭质粒，下列说法中不正确的选项是 。
A、可以在两种不同类群的宿主中存在和复制
B、有且只有一套复制起始点和选择标记
C、不但适用于原核生物，也可以适用于真核生物
D、在农杆菌介导的植物转基因（叶盘法）过程当中，T-DNA载体给体质粒是穿梭质粒

2、农杆菌介导的植物转基因技术的优势，下列说法中不正确的是 。
A、转入的外源基因通常呈预期的孟德尔遗传
B、可插入的外源基因通常很小
C、操作简单，不需要特殊仪器
D、外源基因低拷贝转入, 优先插入具有转录活性的区域

3、对应野生型Ti质粒，下列说法中正确的是 。
A、由于太大、酶切位点受限等原因，不能够直接被科学研究所应用
B、是穿梭质粒
C、需要辅助质粒完成其侵染植物的过程
D、是发根农杆菌的功能质粒

4、外源基因导入植物的方法有哪些 。
A、直接转化法
B、化学诱导法
C、生殖细胞侵染法
D、病毒介导法

5、农杆菌介导的植物转基因技术，下列说法中不正确的是 。
A、可以根据研究目的和特点选择不同的方法，且都可以获得稳定的转基因植株。
B、野生型Ti质粒具有植物转基因的所需的各种原件，只要将目的基因插入该质粒中，便可以用于科学研究。
C、农杆菌介导的植物转基因技术相对简单且高效
D、对于双子叶植物，使用农杆菌介导的转基因方法，基因沉默现象少, 基因转化的效率高。

6、下列关于制作叶盘（外植体）的操作正确的是 。
A、选取嫩叶叶片
B、随机剪成不同的大小的叶盘
C、剪去主叶脉后，再剪成不同大小的叶盘
D、消毒和剪制操作需要在无菌环境下完成

7、下列缩写中，对应正确的是 。
A、STR:链霉素
B、Rif:利福平
C、Kana:卡那霉素
D、Amp:氨苄青霉素

8、T-DNA可以在目标宿主植物染色体的任何区域内插入，但不会造成任何插入失活。

9、农杆菌介导的植物转基因技术，都可以获得稳定的转基因植物。

10、双元载体系统中的两个质粒（Ti辅助含质粒和T-DNA给体载体质粒）是两个相容的质粒。

11、T-DNA给体载体质粒含有了目的基因和抗性基因，可以独立完成植物转基因过程。

12、在转基因操作过程中，外植体制备过程中不需要无菌操作，但在转化过程中是需要无菌的。

19 三亲接合法转化蓝藻（研学）

三亲接合法转化蓝藻单元测验

1、用于三亲接合转化的蓝藻是处于哪个生长阶段 。
A、迟缓期
B、对数期
C、稳定期
D、衰亡期

2、三亲接合法中，运载菌和接合辅助菌的混合比例是 。
A、1：1
B、10：1
C、1：2
D、1：5

3、三亲接合法中，菌菌混合液与蓝藻的的混合比例是 。
A、1：2
B、10：1
C、1：1
D、1：5

4、三亲接合法中的“三亲”是指 。
A、运载菌
B、接合辅助菌
C、蓝藻
D、细菌

5、蓝藻进行生物转化的方式 。
A、电转化
B、自然转化法
C、三亲接合法
D、氯化钙转化法

6、三亲接合法中，运载菌和接合辅助菌的培养条件是30℃，190r/min。

7、三亲接合法中，蓝藻的培养条件是30℃，135r/min。

8、三亲接合法中，运载菌中的质粒是带有目的基因的能在蓝藻中表达的质粒。

9、三亲接合法中，运载菌和接合辅助菌只需活化1次。

10、三亲接合法中，蓝藻的细胞数目要达到10的7次方。

20 Southern杂交（研学）

Southern杂交单元测验

1、Southern杂交，预杂交的温度是 。
A、37℃
B、55℃
C、65℃
D、68℃

2、本实验中制备探针的方法是 。
A、随机引物合成法
B、PCR法
C、RT-PCR法
D、生物素标记法

3、下列试剂可用于沉淀DNA的有 。
A、异丙醇
B、无水乙醇
C、无水甲醇
D、70%乙醇

4、本实验中提取基因组DNA时，破碎小麦叶片所用的方法 。
A、冻融法
B、液氮研磨
C、加入细胞提取液
D、超声波法

5、基因组DNA进行电泳检测，所用琼脂糖凝胶的浓度是0.3%。

6、提取基因组DNA时，应尽量在低温下进行。

7、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。

8、杂交的目的是封闭膜上所有非特异性吸附位点。

9、洗膜的目的是洗去滤膜上未与DNA杂交的及非特异性杂交的探针。

10、转移膜装置中，放重物的目的是建立液体从皿中经凝胶向膜流动的液流，以洗脱凝胶中变性DNA，并使其聚集在膜上。

21 序列比对与BLAST实验（研学）

序列比对与BLAST实验单元测验

1、下列关于序列的相似性与同源性概念的说法不正确的是 。
A、相似性是序列之间相关的一种度量
B、同源性是指序列所代表的物种具有共同的祖先
C、序列A与B之间的序列相似性为80%
D、序列A与B具有80%的同源性

2、下列关于序列的两两比对与多序列比对概念的说法不正确的是 。
A、两两比对指的是两条序列之间的对齐过程
B、多序列比对指的是三条或三条以上的序列进行对齐的过程
C、两两比对通常需要以多序列比对为基础进行扩展
D、BLAST输出的结果属于两两比对的形式

3、有关BLAST程序的描述不正确的是 。
A、makeblastdb用于准备查询数据库文件
B、BLASTN可用于将一条RNA序列搜索蛋白质数据库
C、BLASTP可用于将一条蛋白质序列搜索蛋白质数据库
D、TBLASTX可用于将一条RNA序列搜索核酸序列数据库

4、BLAST实现过程的说法不正确的是 。
A、首先要去除低复杂度序列
B、K-mer划分时不需要相互重叠
C、HSP的得分需要根据替换矩阵来完成
D、BLAST的输出结果会标注显著性检验指标

5、下列关于BLAST输出结果的描述不正确的是 。
A、BLAST的输出结果有多种形式，常用的m6和m7格式
B、Bit-score指标可用于不同BLAST结果之间的横向比较
C、E-value值越大，结果越可信
D、Score值越大，结果越可信

6、在查询序列长度，目标数据库大小及计算平台配置相同的情况下，哪个BLAST程序计算速度最慢的 。
A、BLASTN
B、BLASTP
C、BLASTX
D、TBLASTX

7、下列关于BLAST软件说法正确的是 。
A、BLAST是一种局部比对算法
B、BLAST集成了多种不同的比对程序，用于实现不同的搜索目的
C、BLAST过程随着查询序列长度的增加，比对速度会越来越快
D、BLAST常用的目标数据库的类型有核苷酸和蛋白质序列两种

8、下列关于序列比对的说法正确的是 。
A、序列比对的目的就是要寻找序列之间的相似性
B、序列比对根据比对的策略可分为全局比对和局部比对
C、序列比对的结果可用于推断序列在结构、功能及进化方面的关系
D、BLAST 工具是一种快速实现序列比对的办法

9、进行BLAST实验前，需要完成哪些实验准备 。
A、安装BLAST主程序
B、准备查询序列
C、准备目标数据库
D、安装多序列比对工具

10、下列哪些步骤可以提高BLAST的搜索效率 。
A、去除查询序列中的低复杂度序列
B、K-mer划分查询序列
C、显著性指标计算
D、搜索过程中只考虑高得分片段

22 蛋白纯化系统纯化AKP（研学）

蛋白纯化系统纯化AKP单元测验

1、常用的蛋白纯化工艺放大的原则是 。
A、等粗放大
B、等高放大
C、等效率放大
D、以上都对

2、能够按分子量大小对蛋白质进行纯化的层析介质有 。
A、亲和层析介质
B、反相层析介质
C、凝胶过滤层析介质
D、离子交换层析介质

3、蛋白纯化流出曲线上，上样过程中从层析柱出现的流出峰又称为 。
A、洗脱峰
B、再生峰
C、穿过峰
D、变性峰

4、离子交换层析介质常常按如下方式进行保存 。
A、20%乙醇中4℃保存
B、20%乙醇中常温保存
C、NaCl溶液中4℃保存
D、水中4℃保存

5、小规模纯化过程中上样量是A mg。如果计划在大规模纯化过程中上样量扩大n倍，那么，层析柱的内径、高度以及层析流速该做如何调整 。
A、内径扩大n倍
B、流速扩大n倍
C、高度不变
D、高度扩大n倍

6、纯化系统纯化蛋白过程中，收集流出样品的方式有哪些种 。
A、按固定体积进行收集
B、按流出峰参数变化进行收集
C、按流出峰斜率变化进行收集
D、按流出峰紫外吸收值变化进行收集

7、使用蛋白纯化系统纯化样品时，待纯化样品无需过滤，离心后可以直接上样

8、一般来说，离子交换层析适合粗纯化阶段，适合大体积上样。

9、在蛋白质纯化过程中，速度越快，分辨率越高。

10、离子交换层析结束后，可以用0.5 mol/L 的NaOH进行层析介质再生。

生物化学与分子生物学综合实验期末考试

生物化学与分子生物学综合实验期末考试

1、关于琼脂糖凝胶中DNA回收的说法，错误的是 。
A、漂洗液中含乙醇
B、吸附柱中含有能可逆吸附DNA分子的基质
C、高盐吸附，低盐洗脱
D、膜结合液中含乙醇

2、关于质粒载体DNA的说法，错误的是 。
A、共价闭合环状超螺旋的双链DNA分子
B、在溶液ph=8时，带负电
C、溶于水，不溶于有机试剂如氯仿异戊醇
D、分子量很大

3、提取质粒DNA中使用的溶液I中含有EDTA，EDTA的作用是 。
A、有利于重悬菌体
B、增加溶液的粘度
C、螯合溶液中的二价金属离子，抑制依赖于二价离子的DNA酶活性
D、调节溶液的pH

4、我们对某个蛋白进行了纯化。我们使用了亲和层析后，对样品跑了自然胶（Native PAGE），发现其包含有两条条带。而如果样品拿来跑SDS-PAGE，则发现其包含有一条条带。那么，下一步纯化我们可以首先考虑什么技术 。
A、再进行一轮亲和层析
B、离子交换层析
C、凝胶过滤层析
D、疏水相互作用层析

5、关于蓝白斑筛选说法，错误的是 。
A、蓝白筛选可以区分转化子与非转化子
B、蓝白筛选可以确定插入外源的序列是否正确
C、蓝白筛选也叫α-互补
D、蓝白筛选中，需要在固体培养基中加入诱导物IPTG

6、Lac表达体系中，能够解除阻遏蛋白阻遏作用的物质是 。
A、葡萄糖
B、乳糖
C、半乳糖
D、果糖

7、T7表达体系不需要 。
A、T7 RNA 聚合酶
B、T7启动子
C、Lac 阻遏蛋白
D、Taq DNA聚合酶

8、下面哪种层析方法是利用蛋白所带的电荷来完成的 。
A、亲和层析
B、凝胶过滤层析
C、离子交换层析
D、疏水相互作用层析

9、在外源基因的诱导表达实验中，诱导菌株表达碱性磷酸酶AKP的诱导物是 。
A、X-gal
B、IPTG
C、甘油
D、葡萄糖

10、利用对硝基酚磷酸作为底物测试碱性磷酸酶的活性，测定其产物光吸值的波长是 。
A、410nm
B、260nm
C、340nm
D、600nm

11、在外源基因的诱导表达实验中，同时表达含空质粒pETBlue-2的菌的目的是 。
A、检测其表达效果
B、该质粒也能表达出目的蛋白AKP
C、检测有无污染
D、为阴性对照，便于比较分析结果

12、最适合用来分离50KD蛋白 聚丙烯酰胺凝胶的T值是 。
A、4%
B、5%
C、12%
D、20%

13、聚丙烯酰胺凝胶电泳中过硫酸铵APS的作用是 。
A、交联剂
B、加速剂
C、凝固剂
D、催化剂

14、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，影响蛋白样品迁移率的因素是 。
A、所带电荷多少
B、蛋白形状
C、蛋白分子大小
D、凝胶浓度

15、大肠杆菌热激转化实验过程中，常用的热激温度和时间分别是 。
A、10℃ 90s
B、90℃ 90 s
C、42℃ 90 s
D、70℃ 90 s

16、大肠杆菌碱性磷酸酶AKP的主要活性是 。
A、水解DNA
B、水解RNA
C、水解磷酸单酯
D、水解蛋白质

17、某一蛋白质进入了精细纯化阶段，且发现目的蛋白质和其他杂蛋白质的分子量存在较大的差别。此时，建议最好选用 方法进行纯化
A、亲和层析
B、离子交换层析
C、疏水层析
D、凝胶过滤层析

18、如果你发现某个蛋白无法在37°C下可溶表达，下面那个方法不合理 。
A、与标签形成融合蛋白表达
B、溶解包涵体并且重折叠
C、降低表达时间
D、低温表达

19、下面哪种技术不是蛋白质的主要研究手段 。
A、定点突变
B、结构解析
C、. RT-PCR
D、计算模拟

20、从碱性磷酸酶AKP酶活性检测结果，可以得到的结论是 。
A、可以筛选出目的基因
B、可以初步确定目的基因AKP已表达 且表达的蛋白有活性
C、可以检测表达的蛋白是否全为可溶性表达
D、可以确定其表达蛋白的分子量

21、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，影响蛋白样品迁移率的因素是 。
A、所带电荷多少
B、蛋白形状
C、蛋白分子大小
D、蛋白浓度

22、在重组子筛选实验中，从转化菌中筛选DNA重组体的常用方法不包括 。
A、α互补
B、插入失活
C、DNA序列测定
D、质粒的小量快速提取

23、碱裂解法提取质粒DNA时，对溶液Ⅱ的作用说法错误的是 。
A、裂解细胞
B、悬浮细胞
C、变性蛋白
D、变性基因组DNA

24、有一个蛋白，一共有100个，其中含有含有4个天冬氨酸，2个谷氨酸，没有精氨酸和赖氨酸。假设你是用pH 7.0的缓冲液。那么下面哪种纯化方案是肯定不可行的？
A、阴离子交换层析+凝胶过滤
B、阳离子交换+凝胶过滤
C、亲和层析+凝胶过滤
D、亲和层析+阴离子交换+凝胶过滤

25、酶促反应的各参数中，最能准确体现酶与底物亲和力的是 。
A、Ks
B、Vmax
C、Km
D、Kcat

26、与溶剂对照组DMSO比较，免疫抑制剂环孢菌素A对小鼠脾细胞中IL-2基因和actin基因表达的影响是 。
A、抑制ionomycin和PMA引起的小鼠脾细胞中IL-2基因的表达
B、促进ionomycin和PMA引起的小鼠脾细胞中IL-2基因的表达
C、抑制小鼠脾细胞中actin基因的表达
D、促进小鼠脾细胞中actin基因的表达

27、下列哪个试剂不是实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR, qRT-PCR)中需要的 。
A、Green Premix Taq enzyme
B、模板cDNA
C、RNA
D、上下游引物及Reference Dye

28、可以确保重组子中的外源基因没有突变的方法是 。
A、核酸杂交
B、DNA测序
C、抗药性筛选
D、限制性酶切法

29、某一个蛋白的等电点为6.0。那么如果它使用的缓冲液pH为7.5，其可能带什么电荷 。
A、正电荷
B、负电荷
C、不带电荷
D、取决于盐浓度

30、某一个蛋白可以与镍离子相互作用，其等电点为9.0。所用缓冲液pH为7.0。下面哪种层析方法不能用于它的纯化 。
A、亲和层析
B、阴离子交换
C、阳离子交换
D、凝胶过滤

31、下面哪种层析方法是利用蛋白分子大小来完成的 。
A、亲和层析
B、离子交换层析
C、疏水相互作用层析
D、凝胶过滤层析

32、碱性磷酸酶催化的反应中，通过测定，得知在最适反应条件下，在40 ml酶样品的作用下，每5分钟有80 毫摩尔的磷酸对硝基苯酚分子水解为对硝基苯酚与磷酸，则1 ml酶样品所含的酶活力国际单位（IU）数为 。
A、20，000
B、40，000
C、200，000
D、400，000

33、已知竞争性抑制剂的浓度 [I] = 3Ki，底物浓度 [S] = 4Km，则根据米氏方程计算出的反应速率v 等于 。
A、Vmax/2
B、Vmax/3
C、Vmax/4
D、Vmax/5

34、连续法测定酶活性的正确步骤是 。 ① 利用分光光度计连续测定吸光度的变化；② 利用吸光度变化的动力学曲线与DA值计算酶活力；③ 将适量酶加入底物溶液中，快速混合；④ 将酶与底物的混合液迅速转移入比色杯中，放入分光光度计。
A、①②③④
B、②③①④
C、③④①②
D、④②①③

35、我们打算利用一系类纯化方法提纯一个酶。一共经历了4步，每一步纯化后，我们测量了样品的比活力。从第一步到第四步，比活力分别为（单位 U/mg）：1000， 3000， 3100， 9000。请问哪一步效果不是特别好可以改进 。
A、第一步
B、第二步
C、第三步
D、第四步

36、下列哪个不是酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测抗体效价的方法 。
A、间接法
B、竞争法
C、双抗体夹心法
D、二喹啉甲酸(BCA)法

37、在琼脂糖凝胶电泳中，哪些因素会影响DNA分子在电泳中的迁移率 。
A、分子构型
B、带电荷多少
C、电场中的电流电压
D、分子大小

38、关于琼脂糖凝胶电泳说法，正确的是 。
A、电泳时除了产生电荷效应还有分子筛效应
B、是实验室最常用的电泳技术之一
C、电泳后样品需要检测，才能显出带型
D、除了用于分离核酸，也可用于分离蛋白质

39、优化PCR扩增体系，可以优化哪些因素 。
A、模板纯度
B、底物dNTP的浓度
C、退火温度
D、模板序列

40、关于碱裂解法提取质粒DNA的说法，正确的是 。
A、加入无水乙醇可以沉淀浓缩质粒DNA
B、溶液Ⅱ的作用是使DNA变性
C、质粒DNA构象紧凑不会变性
D、溶液Ⅲ的作用是使DNA复性

41、生物大分子分离纯化的依据是生物大分子之间的物理化学性质和生物学性质上的差异，比如 。
A、分子大小
B、形态
C、亲和性
D、溶解度

42、外源DNA进入大肠杆菌受体细胞常用的转化方法有 。
A、化学试剂法
B、显微注射法
C、电转化法
D、原生质体转化法

43、常用的蛋白水平筛选方法有 。
A、免疫学检测如western blot
B、测定酶活性
C、检测蛋白分子大小
D、检测其结合功能或调节功能如DNA结合蛋白

44、适用于pETBlue-2载体克隆且能进行蓝白筛选的受体细胞有 。
A、TunerTM (DE3) placI
B、DH5a
C、JM109
D、NovaBlue

45、对不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳说法，正确的是 。
A、包括2层凝胶（分离胶和浓缩胶）
B、主要用于蛋白质样品的分离与分析
C、pH不连续
D、凝胶孔径不连续

46、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳具有的作用包括 。
A、浓缩效应
B、电荷效应
C、分子筛效应
D、分离效应

47、分光光度计由下面哪几部分组成 。
A、光源
B、样品室与检测器
C、显示与存储系统
D、信号处理器

48、考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质浓度的优点是 。
A、试剂配制简单
B、操作简便、快捷、反应灵敏
C、检测蛋白质范围一般在10～100 μg
D、一种常用的微量蛋白质快速测定方法

49、制作SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验所用样品时，蛋白样品中加入了样品处理液（也叫蛋白上样缓冲液），其作用是 。
A、样品处理液里含有溴酚蓝，可以指示样品的迁移位置。
B、样品处理液里含有甘油，可以增加样品密度，使样品上样时沉到样品孔底部。
C、样品处理液里含有SDS，SDS可以使样品中的蛋白带电荷一致，减少电荷对电泳结果的影响。
D、其中的巯基乙醇是还原剂，打开蛋白内的二硫键。

50、有关PCR的描述，正确的是 。
A、PCR是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法
B、PCR是以DNA为模板进行扩增
C、扩增的对象是氨基酸
D、一般选用高温进行模板变性，低温退火，中温延伸

51、下列关于酶促反应动力学研究的描述中，正确的是 。
A、Vmax与酶的浓度有关
B、酶促反应动力学只能用来研究底物浓度的变化对酶促反应速率的影响作用
C、在酶促反应开始之后的某一段时间内，酶与底物结合形成中间复合物的速率等于中间复合物分解的速率
D、酶活力测定条件之一的最适pH对所有酶来说都是一样的

52、能够与游离的酶结合的抑制剂是 。
A、不可逆抑制剂
B、竞争性抑制剂
C、反竞争性抑制剂
D、非竞争性抑制剂

53、关于实时荧光定量PCR的说法中正确的是 。
A、在PCR反应中，引入一种荧光物质，随着PCR反应的进行，反应产物不断累计，荧光强度也等比例增加。
B、循环阈值Ct指的是PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号到达设定的阈值时所经过的扩增循环次数。
C、定量方法有绝对定量和相对定量。
D、该技术由于具有定量、特异、灵敏和快速等特点。

54、为了观察环孢菌素A对小鼠脾细胞IL-2基因表达的影响，需要在原代培养的小鼠脾细胞中加入离子霉素（ionomycin）和佛波酯（PMA），其作用是 。
A、引起胞内钙离子浓度的升高
B、激活钙调蛋白磷酸酶
C、引起胞内钙离子浓度的降低
D、抑制钙调蛋白磷酸酶

55、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可用来测定蛋白亚基分子量

56、外源基因在大肠杆菌中诱导表达不同蛋白， 使用的温度可能不同，可以是低温如16℃表达，也可能是37℃表达

57、连接反应通常在37℃下进行。

58、在测定酶的最适温度时，其他影响酶活性的因素应保持不变

59、大肠杆菌感受态细胞制备过程中扩大培养细胞的生长密度一般以刚进入对数期或对数生长前期时为好。

60、琼脂糖凝胶电泳检测1800bp DNA时，比较合适的凝胶浓度是1%。

61、只要一种缓冲液里面两种限制性内切酶都具有很高的活性，就可以使用它来实现双酶切。

62、在进行蓝白筛选时，在固体培养基中加入的半乳糖苷酶的底物是半乳糖。

63、蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳必须使用SDS，如果没有SDS处理电泳结果毫无意义。

64、不同的启动子其有不同的启动效率。

65、制备琼脂糖凝胶时，必须使用电泳缓冲液配置凝胶溶液。

66、电子天平使用时可以不用调水平，但需要依据称量需求选择不同精度和量程的天平。

67、LB培养基使用紫外线消毒灭菌后可以直接使用。

68、稀有密码子会影响到翻译的效率。

69、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白的迁移率与其分子量成线性关系。

70、在实际工作中，我们通常使用Kav，也就是有效分配系数来代替Kd。计算Kav的话，需要测定出外水体积Vo、柱体积Vt、洗脱体积Ve。

71、凝胶层析是根据被分离蛋白质所带电荷性质，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法

72、琼脂糖凝胶电泳过程中，超螺旋构型的质粒DNA比开环构型的迁移速度慢。

73、在测定酶活力的实验中，可以任意截取一段时间，用这段时间内酶促反应的平均速率代表酶促反应的初速率

74、IC50被定义为抑制分数为0.5时的抑制剂的浓度。

75、焦磷酸二乙酯可以破坏或抑制RNA酶活性。

76、不可逆抑制剂通常利用非共价作用与酶结合。

77、在凝胶层析中，分子量小的卵清蛋白比分子量大的牛血清白蛋白先流出来。

78、离心收集菌液时，需要先使用天平平衡才能离心，离心时可以不带离心管盖平衡。

79、超声破碎菌体细胞时，要将样品放在冰浴中，其作用是超声破碎过程中会产热，冰浴可以降低温度，也可以维持样品的活性。

80、外源基因在大肠杆菌中的诱导表达，使用IPTG的浓度一般通过实验摸索出来。

81、蓝白筛选不能区分转化子与非转化子。

82、荧光PCR定量方法中的相对定量是通过检测目的基因相对于内参基因的表达变化来实现定量的，可以比较来源不同的样本目的基因表达量的差异。

83、Western blot是将待检测蛋白质（或酶）经聚丙烯酰胺凝胶电泳后，转移到固相载体上，再用“抗体-抗原”免疫反应或“DNA-蛋白质”结合反应鉴别膜上的蛋白质。

学习通生物化学与分子生物学综合实验

生物化学与分子生物学是现代生命科学的重要分支，其研究对象是生物分子的组成、结构、性质和功能以及生物分子之间的相互作用关系。本实验旨在通过实践操作，加深对生物化学与分子生物学基础知识的理解和掌握。

实验一：DNA的提取和酶切

实验目的：通过提取DNA和酶切实验，了解DNA的基本结构和酶切的原理。

实验原理

DNA的提取：DNA的提取方法主要有两种，一种是化学提取法，另一种是机械破碎法。本实验采用化学提取法，其步骤如下：

1. 将植物细胞磨成细胞糊。
2. 加入破细胞液，破坏细胞壁和细胞膜。
3. 加入蛋白酶，分解细胞内蛋白质。
4. 加入盐，使DNA与其他物质分离。
5. 加入酒精，使DNA析出。

酶切实验：DNA酶切是指利用酶切剪切DNA，使其断裂为特定长度的DNA分子。酶切是DNA分子生物学研究中重要的工具之一。本实验采用限制性内切酶EcoRI对DNA进行酶切，其原理如下：

1. EcoRI是一种限制性内切酶，可将含有GAATTC序列的DNA分子切割为两段。
2. ECORI可以将DNA分子切割为带有粘性末端或平滑末端两种。
3. 带有粘性末端的DNA分子可以通过DNA连接酶将两个DNA分子连接起来，形成重组DNA分子。

实验步骤

实验材料：菠菜叶片，2％肉汤，蛋白酶，盐，95％酒精，EcoRI，DNA电泳仪，琼脂糖凝胶，TBE缓冲液。

1. 取适量新鲜的菠菜叶片，冷冻、解冻或直接放入液氮冷冻后磨成细胞糊。
2. 加入2％肉汤使DNA释放，加入少量蛋白酶，分解细胞内蛋白质。
3. 加入盐混合均匀，使DNA与其他物质分离。
4. 采用95％酒精沉淀DNA，将DNA拉出，挂在玻璃棒上晾干。
5. 采用EcoRI对提取出的DNA进行酶切，将荧光标记的DNA片段通过电泳分离得到。
6. 在琼脂糖凝胶中进行电泳分离。
7. 用紫外线透射仪观察琼脂糖凝胶中DNA片段的迁移情况。

结果分析

经过琼脂糖凝胶电泳分离，可以观察到DNA片段的迁移情况。在限制性内切酶EcoRI作用下，DNA分子被切割成大小不同的片段。不同大小的DNA片段在电场作用下迁移的速度不同，从而在琼脂糖凝胶中呈现出不同的带状图案。通过比较带状图案，可以分析DNA片段的大小和数量，从而推断DNA的结构和功能。

实验二：蛋白质的分离和纯化

实验目的：通过蛋白质的分离和纯化实验，了解蛋白质的结构和功能。

实验原理

蛋白质的结构和功能是生物化学和分子生物学研究的重点之一。在生物体内，蛋白质通过多种方式与其他分子相互作用，从而发挥不同的生理功能。本实验采用离子交换色谱法对蛋白质进行分离和纯化，其原理如下：

1. 离子交换色谱法是一种基于蛋白质带电性质的分离方法。
2. 通过将蛋白质溶液加入到带有离子交换基团的树脂柱中，蛋白质会与树脂柱表面的离子交换基团发生作用。
3. 蛋白质的分离和纯化可以通过调节离子交换柱的pH值、盐浓度、离子强度等参数实现。

实验步骤

实验材料：复方胰酶、牛血清白蛋白、盐酸、离子交换柱。

1. 将牛血清白蛋白加入缓冲液中调节pH值，使其带有负电荷。
2. 将具有正电荷的复方胰酶加入蛋白质溶液中，使其与蛋白质相互作用。
3. 将蛋白质溶液加入带有离子交换基团的柱中，调节柱的pH值、盐浓度、离子强度等参数，使蛋白质与离子交换基团发生作用。
4. 洗脱离子交换柱中的非特异性吸附物，得到纯化的蛋白质。

结果分析

经过离子交换色谱分离和纯化，可以得到纯化的蛋白质，并通过各种生物化学和分子生物学方法分析蛋白质的结构和功能。蛋白质的结构和功能是生物化学和分子生物学研究的重点之一，对于理解生物体内各种生理过程和疾病的发生发展具有重要意义。

实验三：酶的性质和活性测定

实验目的：通过酶的性质和活性测定实验，了解酶的结构和功能。

实验原理

酶是生物体内一种高效催化分子，能够在适宜条件下促进化学反应的进行。酶的结构和功能是生物化学和分子生物学研究的重点之一。本实验采用色谱法对酶进行分离和纯化，通过活性测定对酶的活性进行检测，其原理如下：

1. 色谱法是一种基于酶的分子大小、电荷、亲和性等性质进行分离的方法。
2. 通过将酶溶液加入到具有特定亲和性的树脂柱中，酶在树脂柱中发生吸附和洗脱，从而实现对酶的分离和纯化。
3. 通过活性测定对酶的活性进行检测和分析，可以了解酶的催化机制、底物特异性、受体亲和力等性质。

实验步骤

实验材料：乙酰胆碱酯酶、硫酸钠、硫酸铜、碳酸钠、氨水、乙酰胆碱和乙酰胆碱酯酶标准品。

1. 将乙酰胆碱、硫酸钠、硫酸铜、碳酸钠、氨水等混合，制成含有乙酰胆碱酯酶底物的反应液。
2. 将酶样品加入到含有乙酰胆碱酯酶底物的反应液中，使其在适宜条件下发生催化反应。
3. 将反应液分别加入到经过纯化的酶样品和标准品溶液中，测定反应液中游离的酰胆碱含量。
4. 通过比较游离酰胆碱含量，计算出酶样品和标准品溶液中酶的活性。

结果分析

通过活性测定和分析，可以了解酶的催化机制、底物特异性、受体亲和力等性质，为深入研究酶的结构和功能提供重要的实验依据。酶的结构和功能是生物化学和分子生物学研究的重点之一，对于理解生物体内各种生理过程和疾病的发生发展具有重要意义。

实验四：蛋白质的定量和分析

实验目的：通过蛋白质的定量和分析实验，了解蛋白质的结构和功能。

实验原理

蛋白质是生物体内多种生理过程和疾病发生发展的重要物质基础，其定量和分析是生物化学和分子生物学研究的重点之一。本实验采用免疫印迹法对蛋白质进行定量和分析，其原理如下：

1. 免疫印迹法是一种基于抗体与抗原反应的分子检测方法。
2. 通过将蛋白质样品加入SDS-PAGE电泳胶中，进行电泳分离和半干转移（Semi-Dry Blotting）。
3. 通过将抗体加入到蛋白质样品中，与蛋白质特异性结合。
4. 通过将与抗体结合的蛋白质标定物加入到免疫印迹膜中，与抗体结合，形成带状图案。
5. 通过比较带状图案和标准品，计算出蛋白质样品的浓度。

实验步骤

实验材料：蛋白质样品，SDS-PAGE电泳胶，半干转移系统，抗体标定物和免疫印迹膜。

1. 将蛋白质样品加入SDS-PAGE电泳胶中，将电泳胶分离和转移到免疫印迹膜上。
2. 将抗体加入到蛋白质样品中，与蛋白质特异性结合。
3. 将与抗体结合的蛋白质标定物加入到免疫印迹膜中，与抗体结合，形成带状图案。
4. 通过比较带状图案和标准品，计算出蛋白质样品的浓度。

结果分析

通过蛋白质的定量和分析实验，可以了解蛋白质的结构和功能，并为深入研究蛋白质的生物学特性提供重要的实验依据。蛋白质的结构和功能是生物化学和分子生物学研究的重点之一，对于理解生物体内各种生理过程和疾病的发生发展具有重要意义。

实验五：PCR技术与基因克隆

实验目的：通过PCR技术和基因克隆实验，了解PCR技术和基因克隆的原理和应用。

实验原理

PCR技术是一种基于DNA复制酶的反应，能够在体外制备特定DNA序列的大量拷贝。PCR技术在分子生物学研究中有着广泛的应用，包括基因克隆、基因突变、DNA测序、DNA指纹鉴定等方面。本实验通过PCR技术和基因克隆实验，了解PCR技术和基因克隆的原理和应用，其原理如下：

1. PCR技术是一种体外DNA复制技术，利用DNA聚合酶进行模板引导下的DNA链延伸。
2. PCR反应液组成：模板DNA、DNA聚合酶、引